...利用重组DNA技术制备β-半糖苷酶的两个片段:大片段称为酶受体(enzymeacceptor,EA),小片段称为酶供体(enzymedonor,ED)。两个片段本身均不具酶活性,但在合适的条件下结合在一起就具有酶活性。利用这两相片段的特性...
...mmoo/LNaCl1%SDS500μg/ml蛋白酶K PH8.05μm组织切片↓常规脱蜡、水化↓第一次溶液A孵育(去上清)↓第二次溶液A孵育(留上清)↓氯仿-异戊醇抽提↓RNA酶和蛋白酶消化↓酚抽提↓沉淀↓(却除未螺旋化DNA)↓透析图...
...DNA重组技术中对核酸的“精雕细刻”主要用酶作为工具。分子生物学研究过程中发现的酶,许多都用作工具,表20-列出最常用的几种工具酶。限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease)在重组DNA技术中有重要地位,在此较详细...
...核苷酸,真核生物一般100?00核苷酸。最后再将多个岗崎片段连接成一条完整的链。由于前导链的合成是连续进行的,而随从链的合成是不连续进行的,所以从总体上看DNA的复制是半不连续复制(图16-4)。图16-4 DNA的半不连续复制DNA复制的...
...比例增高,游离的具有酶活力的酶标半抗原的量就减少。因此在反应后酶活力大小一标本中的半抗原呈一定的比例,从酶活力的测定结果就可推算出标本中半抗原的量。图15-2EMIT原理示意图二、克隆酶供体免疫测定利用重组DNA技术制备β-半糖苷酶的两个片段...
...早在1956年Kornberg等就从大肠杆菌提取液中发现了DNA聚合酶,并且得到了DNA聚合酶Ⅰ纯品。DNA聚合酶Ⅰ是由分子量为109000的一条多肽链构成,此酶可被枯草杆菌蛋白酶分解为两个片段,一个片段分子量为76000,有聚合酶活性,...
...磷酸二酯键连接而成的线性多核苷酸片段。目前多由仪器自动合成而用作DNA合成的引物(Primer)、基因探针(probe)等,在现代分子生物学研究中具有广泛的用途。表示一个核酸分子结构的方法由繁至简有许多种(图15-2)。由于核酸分子结构除了两端和...
...可传给后代。(二)参与复制的酶类DNA的复制过程极为复杂,但其速度甚快,这是由于许多酶参与了复制过程。1.DNA聚合酶(DNApolymerase)。四种脱氧核糖核苷酸(dNTP,N代表A、T、G、C四种碱基)是DNA合成的原料。在原有DNA...
...遗传工程就是基因工程。对多数生物来说,基因本质是DNA,基因工程就是要改建DNA,涉及DNA序列的重新组合和建造,所以基因工程的核心就是人工的DNA重组(DNa recombination)。图20-1 基本工程的基本程序重组、建造的DNA分子...
...反转录酶(Reverse transcripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物...
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