...与转化细胞的DNA进行分子杂交,可以直接筛选和鉴定目的序列克隆。常用的方法是将转化后生长的菌落复印到硝酸纤维膜上,用碱裂菌,菌落释放的DNA就吸附在膜上,再与标记的核酸探针温育杂交,核酸探针就结合在含有目的序列的菌落DNA上而不被洗脱。核酸...
...含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子,而且可以繁殖扩增,许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体,就称为基因组DNA文库(genomic DNA library)。如果这个文库足够大,能包含该生物基因组DNA全部的...
...需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时,一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆DNA片段的程序从图23-4可见,外源DNA片段同pBR322都经Bam HⅠ酶切,所以有相同的单链“粘性末端”,通过DNA...
...动脉平滑肌细胞的培养 第六节 血管细胞培养的鉴定 参考文献 第二十三章 转基因动物在动脉粥样硬化研究中的应用 第一节 建立转基因动物的方法 第二节 转基因小鼠的制备 第三节 转基因小鼠模型与动脉粥样硬化 展望 参考文献 第二十四章 DNA的...
...只有纯化繁殖才有意义。纯的无性繁殖系统称为克隆。纯化繁殖DNA就称为DNA克隆或分子克隆,基因的纯化繁殖就称为基因克隆。所以DNA重组和分子克隆是与基因工程密切不可分的,是基因工程技术的核心和主要组成部分。重组DNA、分子克隆甚至成了基因...
...目的序列与载体DNA正确连接的效率、重组导入细胞的效率都不是百分之百的,因而最后生长繁殖出来的细胞并不同都带有目的序列。一般一个载体只携带某一段外源DNA,一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小...
...及其同事在10月2日出版的《美国学会杂志》上解释说,动物实验表明,动脉粥样化形成过程中有自身免疫机制参与。已有证据显示,分支杆菌hsp65是一种关键性抗原。 为研究这种机理,harats博士等设计了两项实验。在第一项实验中,他们应用hps65...
...只有纯化繁殖才有意义。纯的无性繁殖系统称为克隆。纯化繁殖DNA就称为DNA克隆或分子克隆,基因的纯化繁殖就称为基因克隆。所以DNA重组和分子克隆是与基因工程密切不可分的,是基因工程技术的核心和主要组成部分。重组DNA、分子克隆甚至成了基因...
...目前对于基因序列的突变分析国内外多采用直接测序方法,直观又准确。例如,1996年Sakai等报道了对高α脂蛋白血症患者CETP基因内含子10和内含子14片段序列的突变分析。其方法为:采取患者全血根据Kunkel等方法准备基因DNA;...
...。200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中,贮存于-80℃冰箱中。2.转化程序(1)取出200μl感受态细胞慢慢使其溶化,并立即放于冰上,加入DNA或连接反应混合物,DNA量通常≤50mg。用手指弹打试管10次,使之混匀,然后放在冰上...
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