...碱基置换 、微小缺失或插入。近年来不发现一些遗传病是由于基因内的 三核苷酸 重复顺序增加引起的，根据对基因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法（表13-2）。如基因缺失可用 基因探针 杂交，PCR 扩增 直接检测； 点突变 可用 等位基因 特异的 ASO 探针 、SSCP等直接检查。一般无需对家系成员进行分析。但条件是必需知道基因异常的性质，并肯定该异常与...
...后者包括单个碱基置换、微小缺失或插入。近年来不发现一些遗传病是由于基因内的三核苷酸重复顺序增加引起的，根据对基因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法（表13－2）。如基因缺失可用基因探针杂交，PCR扩增直接检测；点突变可用等位基因特异的ASO探针、SSCP等直接检查。一般无需对家系成员进行分析。但条件是必需知道基因异常的性质，并肯定该异常与疾病之间的关系。...
...杂交等带来一定困难。87年Impraim等人首先将PCR技术引入固定包埋组织内DNA分析。他们先从组织标本中提取DNA，再用PCR进行特异性的DNA扩增，应用这种方法，他们成功地从保存30至40年久的组织标本DNA中扩增了HPV 病毒基因 片段。但这种方法需要提取DNA，操作比较繁琐。1988年Shibata等人对Impraim的方法进行了改进。他们将固定包...
...最早且操作简便的杂交类型，由于液相杂交后过量的未杂交 探针 在溶液中除去较为困难和误差较高，所以不如固相杂交那样普遍。近几年由于杂交检测技术的不断改进，商业性 基因探针 诊断盒的实际应用，推动了液相杂交技术的迅速发展，下面对固相杂交和液相杂交分别进行介绍。 （一）固相膜核酸分子杂交方法。 固相核酸杂交多是在膜上进行，因此，以下主要介绍固相膜的核酸分子杂交方法...
...提纯病毒，DNA粗制品及总 RNA 均可作为反应 起始物 ，可直接用临床标本如 血液 、体液、尿液、洗液、脱落 毛发 、细胞、活体组织等粗制的DNA的提取液来扩增检测，省去费时繁杂的提纯程序，扩增产物用一般电泳分析即可，不一定用 同位素 ，无放射性易于推广。 （四）简便：扩增产物可直接供作序列分析和 分子克隆 ，摆脱繁琐的 基因 方法，可直接从RNA或 染色...
基因诊断 操作的对象为 基因 或其片段。基因是遗传学上的一个概念，是在 染色体 上占有一定的位置，表现一定功能的基本单位。基因的物质基础是 脱氧核糖核酸 （ DNA ）（有些 病毒 的基因是 核糖核酸 ， RNA ）。 原核细胞 （如 细菌 和病毒）的基因单位较小，其排布一般是连续的。 真核细胞 的基因一般较大，其排布是不连续的，它被称为 插入序列 的部分所...
...的。 （一）DNA复制的方式 从前面的内容可知，DNA是由两条互补的 多核苷酸 链组成的，其中一条链上的 核苷酸 排列顺序可以决定另一条链上的核苷酸顺序。据此推测，在复制过程中，首先DNA双螺旋的两条多核苷酸链之间氢键断裂，双链解开，然后每条链各自作为模板，以脱氧核糖核苷酸为原料，按照 碱基配对 规律，合成新的互补链。这样形成的两个 子代 DNA 分子 与原...
... 所得到的双链cDNA分子经S1 核酸酶 切平两端后接一个有限制酶切点的接头(Adapter),再经特定 限制酶 消化产生 粘性末端 ，即可与含互补末端的载体进行连接。常用的 克隆载体 是λ 噬菌体 DNA，如λgt、EMBL和Charon 系列等。用这类载体可以得到包含105以上转化子文库，再经前面介绍的筛选方法筛选特定基因克隆。用这种技术获得的DNA探针...
...为 分子杂交 。因此分子杂交的基础是DNA的变性与互补，也可以杂交形成新的双螺旋结构。目前杂交技术已广泛地应用于核酸结构与功能的研究。将已知的特定 基因 （如先天性遗传 疾病 的某些特定基因）用 同位素标记 ，制备成 基因探针 ，利用分子杂交技术，基因探针可与 同源 序列互补形成杂交体，因此可用检测组织细胞内有无特定基因或DNA片段，如临床上已应用于 产前诊...
...，而且，许多PCR的失败都归因于 标本 的制备不当。用于PCR的标本必须经适当处理后才能使用，因为标本中的许多杂质能抑制Taq DNA聚合酶的活性。另外，处理标本可使待 扩增 DNA暴露，能与 引物 复性 。关于PCR标本制备各种专业书中介绍了许多，我们实验发现操作复杂、不慎便容易造成污染，且不实用。现介绍一种简单快速的处理方法即3%异硫氰酸胍和待检标本混合...
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