...等抗体结合胶体金颗粒进行显示,以银显示法加强获得极为满意的定位。总之,电镜水平的原位分子杂交技术在国外还处在不断提高和改进的阶段,在国内此一技术还刚起步。焦仁杰等(1992)报告了以生物素标记腺病毒的基因组探针与整装抽提的细胞进行电镜原位杂交技术,成功地证明了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系,胶体金颗粒呈簇状与串珠状结合在核骨架上。向正华等(1994)应用...
...等抗体结合胶体金颗粒进行显示,以银显示法加强获得极为满意的定位。总之,电镜水平的原位分子杂交技术在国外还处在不断提高和改进的阶段,在国内此一技术还刚起步。焦仁杰等(1992)报告了以生物素标记腺病毒的基因组探针与整装抽提的细胞进行电镜原位杂交技术,成功地证明了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系,胶体金颗粒呈簇状与串珠状结合在核骨架上。向正华等(1994)应用...
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外,又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外,又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
(一)基本原理 在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后,科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似,首先利用地高辛修饰核酸探针,与细胞或组织进行杂交,再用抗地高辛抗血清相连胶体金与之结合,进行细胞或组织特异核苷酸的超威结构定位。为增强金的显示效应,可用银加强法增强...
近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,原位杂交组织化学在染色体铺片的应用主要在三个方面:染色体的基因分配或基因图(Gene assignment)的研究、癌细胞或癌...
近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,原位杂交组织化学在染色体铺片的应用主要在三个方面:染色体的基因分配或基因图(Gene assignment)的研究、癌细胞或癌...
...推测其组织细胞生理、病理意义。但该物质来自何处,是否是阳性细胞合成往往较难判断,结合免疫电镜及双重染色等方法,在某种程度上,有助于推断该物质的来源。然而通常ICC法显示的是组织细胞已经合成的物质(过去时),本身不能说明阳性组织细胞目前的功能状态,亦无法预测细胞将合成何种物质,发挥什么功能,因此,单纯的ICC法存在着被动性。 近年来,ICC法与原位杂交技术结合...
...min,PBS(pH7.2)15min,蒸馏水洗5min,空气干燥。 12.醋酸双氧铀染色20min, 柠檬 酸铅染色15min,空气干燥后电镜观察。 应用本法标记有如下优点:(1)可获迅速的信号检测;(2)形态学保存较好;(3)与放射性同位素原位分子电镜杂交技术的信/噪比例相近。是目前公认在电镜水平应用同位素标记原位杂交技术较为理想的方法。胶体金颗粒电子密...
(1)将整封染色体铺片放置于金网上,在70%的酒精蒸汽固定4~15h,空气干燥。 (2)以强碱使DNA变性,将金网置于2×SSC内(应用0.1n NaOH调整至pH12),室温,2min。 (3) 脱水 ,以70%和95%酒精各冲洗3次,空气干燥。 (4)杂交,金网覆于平面 玻璃 皿( Petri dish)内的杂交液滴上,每滴约10~15μl,将此小碟置于...
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