核酸的序列分析,即核酸一级结构的测定,是现代分子生物学中一项重要技术。目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977年)提出的双脱氧链终止法及Maxam和Gilbert(1977年)提出的化学降解法,其中双脱氧链终止法是目前应用最多,最好的技术。 一、Sanger双脱氧链终止法原理 通常DNA的复制需要:DNA聚合酶,单链DNA模板,带有3'-OH...
以质粒或噬菌体作载体进行DNA克隆,在理论上是很简捷的,即用一种限制酶切割质粒DNA,然后在体外与外源,DNA(如干扰素基因,生长激素基因)相连接,再用所得到的重组质粒转化细菌如大肠杆菌,以鉴定重组DNA。 通常所用的质粒载体有pBR322、pUC18、pUC19等,噬菌载体有M13噬菌体载体等。 图24-1 质粒载体的定向克隆
日本专家近日发表研究成果说,他们新开发出一种针对阿尔茨海默氏症(即早老性痴呆)的脱氧核糖核酸(DNA)疫苗。这种疫苗还处于动物试验阶段,有望减轻现有疫苗疗法的副作用。 阿尔茨海默氏症的诱因是贝塔淀粉样蛋白在脑细胞中沉积,致使大脑发生萎缩。日本东京都神经科学综合研究所研究员松元阳和大仓良夫开发的新疫苗主要利用合成贝塔淀粉样蛋白的DNA制成。 新疫苗的作用机理是...
...结构对于维持这类遗传物质的稳定性和复制的准确性都是极为重要的。 (一)DNA复制的方式 从前面的内容可知,DNA是由两条互补的多核苷酸链组成的,其中一条链上的核苷酸排列顺序可以决定另一条链上的核苷酸顺序。据此推测,在复制过程中,首先DNA双螺旋的两条多核苷酸链之间氢键断裂,双链解开,然后每条链各自作为模板,以脱氧核糖核苷酸为原料,按照碱基配对规律,合成新的互...
...因工程奠定了理论基础;同时酶学、细菌学、病毒学的发展,为基因工程提供了必要的工具。1972-1973年Boyer、Cohn和Berg等创立了DNA克隆技术,打破了种属的界限,第一次使本来只存在于真核细胞中的蛋白质能够在大肠杆菌中合成,这是基因工程诞生的里程碑。科学界公认基因工程的出现是20世纪最重要的科学成就这一。标志人类主动改造生物界的能力进入新的阶段。分...
执行生命功能、表现生命特征的主要物质是 蛋白质 分子 。 DNA 贮存着决定 生物 特征的 遗传信息 ,只有通过蛋白质才能表达出它的生命意义,直接决定 蛋白质合成 及蛋白质特征的不是 RNA 而是DNA,因而人们确定DNA是遗传信息贮存者后就推测DNA是通过RNA去决定蛋白质合成的。50年代末RNA 聚合酶 的发现开始证实了这一推测。 以DNA为模板合成RN...
近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进,重组DNA操作技术包括的范围不断扩大,DNA克隆的方法亦多种多样,特别是PCR技术的应用,以及RFLP、SSCP等技术的开展,使得DNA克隆技术的应用日益广泛。 DNA克隆技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时,可以设计合成扩增引物,进行模板DNA的PCR扩...
一、DNA变性
近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进,重组DNA操作技术包括的范围不断扩大,DNA克隆的方法亦多种多样,特别是PCR技术的应用,以及RFLP、SSCP等技术的开展,使得DNA克隆技术的应用日益广泛。 DNA克隆技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时,可以设计合成扩增引物,进行模板DNA的PCR扩...
新华社伦敦10月6日电,在发现脱氧核糖核酸(DNA)的双螺旋结构中作出突出贡献的诺贝尔奖得主、英国科学家莫里斯·威尔金斯5日在伦敦的一家医院去世,享年87岁。 1962年,威尔金斯与英国科学家弗兰西斯·克里克、美国科学家詹姆斯·沃森分享了诺贝尔 生理学 或医学奖。后两位科学家因为1953年首 先在《自然》杂志上发表文章、提出DNA的双螺旋结构模型而享誉世界,...
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