...声波 )取得DNA随机片段；③在已知 蛋白质 的 氨基酸 顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。 (2)载体DNA的选择： ① 质粒 ：质粒是细菌 染色体 外 遗传因子 ，DNA呈环状，大小为1-200千 碱基对 (kb)。在细胞中以游离 超螺旋 状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是...
...粒以肌注法 免疫 BALB c小鼠 ,每 2周 1次 ,共 3次 ,ELISA检测小鼠的体液免疫应答水平。结果 RT PCR结果显示 ,重组质粒转染组在约 1kb处出现特异的 扩增 带 ;Westernblot检测显示 ,重组质粒转染组 总蛋白 样品在相对 分子 质量 (Mr)为 33.5× 10 3 处出现特异的蛋白带 ,而空质粒载体转染组均没有此相应的D...
...d ，又译 黏粒 ）是一种以 λ噬菌体 （Lambda phage）中的 cos sequences 所建构而成的 质体 ，是常用的 选殖 载体（cloning vector）之一，可用于建构 基因组 库。最高可置入44000个 碱基对 ，高于 质粒 的10000到15000。 参考文献 Bruce A. Voyles (2002) The biology ...
...pcDNA3.1(+)载体上的HindⅢ酶切位点，HindⅢ酶切除去载体基因片段，得到胃癌MG7-Ag模拟表位和通用性Th细胞表位的真核表达载体。结果经序列测定证实：PCR产物为载体基因、HindⅢ酶切位点、MG7-Ag模拟表位及通用性Th细胞表位的融合片段，最终得到的重组pcDNA3.1(+)质粒含有正确编码的以上两种表位的基因片段。他们将MG7-Ag模拟...
...入活 细胞 后有些运载体甚至能 自我复制 ，运载体的 基因组 即便常不在宿 主细胞 的基因组内, 仍然可以得到 表达 。通过将外源DNA插入载体DNA并导入到活细胞中, 就可以在活细胞中表达外源DNA，而进一步研究加载的DNA片段, 其表达的 RNA 或 蛋白质 , 或被表达所影响的特定途径。常用的运载体有 细菌 质粒 、 噬菌体 和动物 病毒 或植物病毒。...
...抗 氨芐青霉素 （anpr）、 抗四环素 (terr)、抗 卡那霉素 (kanr)等。当 培养基 中含有 抗生素 时，只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖，这就把凡未能接受载体DNA的细胞全部筛除掉了。如果外源目的序列是插入在载体的抗药性基因中间使这抗药性基因 失活 ，这个抗药性标志就会消失。例如 质粒 pBR322含有anpr、和terr两个 抗药...
...杂交信号。此方法灵敏度与同位素标记水平相当，简便快速，安全，是一种特异性好的检测手段，具有广泛的应用前景。 HBV-DNA的HRP标记方法：质粒中插入HBV全基因组DNA，长3.2kb，载体为PBR322质粒，4.3kb。将质粒DNA用三蒸水稀释成10ng/μl，取20μl放入EP管，100℃变性5min，加入20u HRP标记试剂，混匀，加入戊二醛20μl...
以质粒或噬菌体作载体进行DNA克隆，在理论上是很简捷的，即用一种限制酶切割质粒DNA，然后在体外与外源，DNA（如干扰素基因，生长激素基因）相连接，再用所得到的重组质粒转化细菌如大肠杆菌，以鉴定重组DNA。 通常所用的质粒载体有pBR322、pUC18、pUC19等，噬菌载体有M13噬菌体载体等。 图24-1 质粒载体的定向克隆 一、质粒或噬菌体载体与外源D...
包括人体在内的高等生物基因工程中遇到的一个难题是缺乏合适的基因载体。要求载体对受体细胞没有危害，能安全、稳定地转给后代，使基因的性状得到连续的表达。这对校正某种遗传缺陷或改进某种性状都是十分有用的。目前一些实验室正致力于构建人工微小染色体（microchromosome）。 构建染色体应包括：基因、复制起点、着丝粒和端粒。染色体上需带有基因是不言而喻的。复制...
...的抗原形成的疫苗，现今还没有被用于人群。 基因（核酸）疫苗是相对于基因（核酸）免疫来说的。它是将含有编码特定抗原蛋白质的基因序列克隆到合适的质粒载体上，制备成核酸表达载体，通过肌肉注射等方法将其导入机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白质，从而激发机体免疫系统产生针对外源蛋白质的特异性免疫应答反应。这一基因免疫过程中所使用的核酸表达载体被称为基因疫苗，又...
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