克隆载体 （Cloning Vector）：通常采用从 病毒 、 质粒 或高等生物 细胞 中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将 重组 后的载体引入到 宿主 细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒， 噬菌粒 ， 酵母 人工 染色体 。 对载体的要求：①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要...
所谓 穿梭质粒 是指一类人工构建的 具有两种不同 复制起点 和 选择标记 ，因而可以在两种不同类群 宿主 中存活和复制的 质粒 载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到 真核生物 表达载体 的构建， 如用于 枯草 的pBE2、 酵母 的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒 。这些穿梭质粒不仅可以在 大肠杆菌 中复制...
近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进，重组DNA操作技术包括的范围不断扩大，DNA克隆的方法亦多种多样，特别是PCR技术的应用，以及RFLP、SSCP等技术的开展，使得DNA克隆技术的应用日益广泛。 DNA克隆技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时，可以设计合成扩增引物，进行模板DNA的PCR扩...
DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等），称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素的影响，均可使DNA变性。 通常，可利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化追踪变性过程。因为DNA在260nm处有...
双螺旋DNA进一步扭曲盘绕则形成其三级结构，超螺旋是DNA三级结构的主要形式。自从1965年Vinograd等 人发 现多瘤病毒的环形DNA的超螺旋以来，现已知道绝大多数原核生物都是共价封闭环(covalentlyclosed circle,CCC)分子，这种双螺旋环状分子再度螺旋化成为超螺旋结构(superhelix或supercoil)，如图15-11所...
单链DNA （single－stranded DNA）大部分 DNA 以双螺旋结构存在，但一经热或碱处理就会变为单链状态。单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、 碱基 反应性质等方面都和双链DNA不同。某些 噬菌体 粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
单链DNA （single－stranded DNA）大部分 DNA 以双螺旋结构存在，但一经热或碱处理就会变为单链状态。单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、 碱基 反应性质等方面都和双链DNA不同。某些 噬菌体 粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
(一) DNA 损伤的原因 1.DNA 分子 的自发性损伤 (1)DNA复制中的错误 以DNA为模板按 碱基配对 进行DNA复制是一个严格而精确的事件，但也不是完全不发生错误的。碱基配对的错误频率约为10-1－10-2，在DNA 复制酶 的作用下 碱基 错误配对频率降到约10-5-10-6，复制过程中如有错误的 核苷酸 参入，DNA 聚合酶 还会暂停催化作用...
DNA 和 RNA 统称为 核酸 ，早在1868年就被瑞士年轻医生米歇尔发现，在 真核细胞 中，98%以上的DNA存在于 细胞核 ，少量的DNA分布在 线粒体 中。RNA主要存在于 细胞质 中，占其总量的90%左右。 细胞 外液则无核酸存在。对于非细胞形态的 病毒 来说，或含有DNA，或只含有RNA，因此可按所含核酸类型的不同，将病毒分为DNA病毒与RNA病...
DNA作为遗传物质的基本特点就是能够准确地自我复制，而DNA的互补双螺旋结构对于维持这类遗传物质的稳定性和复制的准确性都是极为重要的。 （一）DNA复制的方式 从前面的内容可知，DNA是由两条互补的多核苷酸链组成的，其中一条链上的核苷酸排列顺序可以决定另一条链上的核苷酸顺序。据此推测，在复制过程中，首先DNA双螺旋的两条多核苷酸链之间氢键断裂，双链解开，然后...
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