对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的,应做下述几个方面的鉴定: 1.抗体特异性的鉴定 除用免疫原(抗原)进行抗体的检测外,还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验,方法可用ELISA、IFA法。例如:①制备抗 黑色素瘤 细胞的McAb,除用黑色素瘤细胞反应外,还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应,以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克...
1.HEP-2细胞涂片的制备HEP-2细胞系人 喉癌 上皮细胞,在完全Eagle培养液中,37 ℃ ,二氧化碳孵育48~72h,使细胞生长达到一定数量,约1.2~1.5×10 6 /ml,经胰酶消化后,可以传代或分装到置有玻片的培养皿中,继续用Eagle液培养及上述条件孵育,48h细胞不仅贴附于玻片上并已长成单细胞层。取出玻片用丙酮固定15min,自然干燥后...
关于自身抗体产生的机理众说纷纭,十分复杂,免疫细胞化学和其他方法的结合,有助于从形态、功能和代谢三个方面深入探讨。根据目前研究的情况,有以下几种学说。
抗肾上腺自身抗体是对肾上腺皮质细胞浆成分的一种器官特异性抗体。主要见于 慢性肾上腺皮质功能减退症 (阿狄森氏病)病人。用间接免疫荧光法检测,阳性率约50%,其他自身免疫病阳性率2%~5%。 1.抗原切片抗原用新鲜肾上腺尸检或手术切除标本,常用 皮质醇增多 症(柯兴氏病)病人手术切除的肾上腺。或取猴肾上腺组织,作冰冻切片。不需固定。 2.间接免疫荧光检查方法 ...
胶体铁的等电点为7.8至7.9,在pH7.4时通过离子键能与抗体IgG(pH5.8~7.3)结合而不影响抗体活性,在此条件下,Seno'对Hale'胶体铁进行了抗体标记,并成功用于免疫细胞化学染色(Seno,et al.1989),抗体标记时,用0.1mol/L碳酸钾将胶体的pH调至7.4按每毫升脱体铁0.2~1mg的蛋白量,将IgG在电磁搅拌下逐滴加入到胶...
对制备的荧光抗体必须进行质量鉴定,主要进行特异性和敏感性两个方面的鉴定。
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价,若二者效价相差较大,则可将荧光抗体稀释至一临界浓度,使特异性染色呈阳性,而使非特异性染色保持阴性,稀释方法和染色效价测定方法相同。
以0~4℃或-20℃低温保存,防止抗体活性降低和蛋白变性。最好加入浓度为1:5000~10000的硫柳汞或1:1000~5000的叠氮钠防腐,小量分装如0.1~1ml,真空干燥后更易长期保存。
用HEP-2细胞或大 鼠肝 细胞作抗原,作间接免疫荧光染色。结果可见细胞核核仁呈现明亮的黄绿色荧光。抗核仁抗体在 硬皮病 、 皮肌炎 、系统性 硬化 症等中最多见。
...加入4g多聚甲醛,加4滴1N NaOH,再用NaOH或Na 2 HPO 4 调ph 至7.4后,再加入0.1mol/lPB Ph7.4 25ml)。组织 脱水 后,用56 ℃ 石蜡包埋,切片3~5μm。56 ℃ 烤干,脱蜡至水洗,取病 人血 清滴加在切片上,37℃45min,用常规间接免疫荧光法染色。荧光显微镜观察,可见G细胞浆呈黄绿色荧光,即是GCA阳性。
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