（一）DNA探针 DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获的DNA探针种类很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和 人类 细胞DNA探针，这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类ALU探针，这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。...
基因探针 基因探针，即 核酸 探针 ，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的 基因 互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过 分子杂交 与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的 基因组 中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是 单链 ，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基...
...A消化掉，再加入大肠杆菌的DNA聚合酶I催化合成另一条DNA链，即完成了从mRNA到双链DNA的逆转录过程。 所得到的双链cDNA分子经S1核酸酶切平两端后接一个有限制酶切点的接头（linker），再经特定的限制酶消化产生粘性末端，即可与含互补末端的载体进行连接。常用的克隆载体是λ噬菌体DNA，如λgt，EMBL和Charon系列等。用这类载体可以得到包含1...
通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法： 1.应用同位素（或非同位素）标记的cDNA探针，检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。 2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交，然后进行放射自显影。 3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA，用特异性细胞...
在大肠杆菌T 4 噬菌体多聚核苷酸激酶（T 4 PNK）的催化下，将γ- 32 P-ATP上的磷酸连接到寡核苷酸的5’末端上。要求标记的寡核苷酸5’端必须带羟基。反应式为： 此法适用于标记合成的寡核苷酸探针。如将底物改为Bio –11 –dUTP，也可以在3’端标记上一个生物素。 寡核苷酸 35 S的3’—末端标记法：将下列液体依次加入Eppendorf管中...
原位启动标记法（Primed in situ labelling,PRINS），又叫寡核苷酸启动法（Oligonucleotide－priming method）是Koch（1987）首先提出的，其基本原理是将未标记的寡核苷酸探针与细胞或组织中的靶DNA或RNA进行杂交，然后该寡核苷酸探针充当引物的作用，在Kelow多聚合酶的催化作用下，将生物素（或地高辛、...
...din – Biotin - Enzyme com－plex, 即亲合素- 生物素-酶复合物。 以上反应AP亦可用HRP代替。 表18-3曱核酸探针的标记分子 标记物性质 标记分子 标记方法 杂交体的检测法 放射性分子 [α-32P]dNTP NT、PCR、RPI 放射自显影或计数 [γ-32P]dNTP TL 放射自显影或计数 125I 碘化 放射自显影或...
在RIA中，标记抗原质量的优劣，直接影响测定结果，必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原，并保持免疫活性不受丧失。
应用于扫描电镜的标记物应能在扫描电镜可分辨的范围内，并能对细胞或组织抗原有较好的定位能力。在选择标记物时应根据研究目的而定，如标记细胞等由于体积较大，可用体积大的标记物；如鉴别阳性（标记细胞）与阴性（未标记细胞），而要定位受体等则需选用较小的，易于辨认的标记物。 常用的标记物为颗粒性标记物。依其特性可分为： 1．蛋白类 如血蓝蛋白、铁蛋白等。 2．病原体类 ...
...网沾取金标蛋白溶液，空气中干燥后醋酸铀复染，在TEM下观察，可见金颗粒周围有一明显的空晕，表示颗粒表面吸附有蛋白质分子。 （2）纯化后免疫金探针是否保持很好的生物学活性是判断其质量好坏的主要指标，因此，在使用之前必须对它的特异性，敏感性进行鉴定。鉴定举例，用阳性抗原片，脱蜡至水，胰蛋白酶消化，加第一抗体（多克隆或单克隆），一般过夜再加标记抗同一抗特异性抗体结...
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