以质粒或噬菌体作载体进行DNA克隆，在理论上是很简捷的，即用一种限制酶切割质粒DNA，然后在体外与外源，DNA（如干扰素基因，生长激素基因）相连接，再用所得到的重组质粒转化细菌如大肠杆菌，以鉴定重组DNA。 通常所用的质粒载体有pBR322、pUC18、pUC19等，噬菌载体有M13噬菌体载体等。 图24-1 质粒载体的定向克隆
噬菌粒 是一类人工构建的含有 单链噬菌体 包装序列、 复制子 以及 质粒 复制子、克隆 位点 、 标记基因 的特殊类型的载体。是一种双链质粒，含 噬菌体 来源的复制子，在 细菌 的 细胞 中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。 噬菌粒具有一下令人瞩目的特征：1.双链DNA既稳定又高产，具...
噬粒 (phagemid或phasmid)是由 质粒 载体和 单链噬菌体 载体构建成的。它们既有质粒的 复制起点 ，又有 噬菌体 的复制起点。因此，在 大肠杆菌 细胞 里，可以按正常的双链质粒 分子 进行复制，生成双链DNA；当存在辅助噬菌体的条件时，在噬菌体 基因 Ⅱ 蛋白质 的作用下，又可像单链噬菌体M13一样按滚环模型复制出 单链 DNA，并在包装成噬...
这是在上述筛选后的进一步分析。目的序列插入载体会使载体DNA限制性酶图谱（restriction map）发生变化，例如一个长600bp的目的序列利用它两端的EooR I和SalI切后的粘末端连接插入pUC19的多克隆点，则重组质粒就增大为3.3kb，用Eoor I和SalI双酶切后会出现600bp和-2.7kb两个DNA片段，提取转化细菌的质粒DNA作酶切...
...使携载基因能促进内皮细胞的生长，已成为该领域研究的热点。 为突破这一研究瓶颈，陶思丰等研究人员采用体外实验研究的方法，选用PTFE为血管材料载体，将pC鄄DI-hVEGF121质粒溶液注入PTFE人工血管，使其质粒进入人工血管壁的孔隙中。接着，将从人脐静脉中分离培养的内皮细胞，种植到携带VEGF基因质粒的PTFE材料表面，经6、24、72和120小时时间点的...
一、质粒DNA的提取及鉴定
（一）载体 载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。 质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组...
（一）载体 载体（Vector）是把外源 DNA （目的 基因 ）导入 宿主 细胞 ，使之 传代 、 扩增 、表达的工具。载体有 质粒 （plasmid）、 噬菌体 、 单链 丝状噬菌体和 粘性末端 质粒（粘粒）、 病毒 等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的 遗传标记 ；有供外源DNA插入的 位点 ；本身体积小等特征。 质粒存在于多种 细菌 ...
... ，并 转录 表达出与该外源性DNA相应的 信使RNA 或 蛋白质 。 DNA重组技术 的主要步骤是： ① 选择并分离能携带外源性 DNA的载体。常用的DNA载体有 细菌 质粒 ( 染色体 外DNA)，或 噬菌体 DNA，如 大肠杆菌 质粒CoLEI及pBR322;λ噬菌体及M13噬菌体DNA等，它们都能插入(或整合)一定长度的外源性DNA片段，并能在寄主细...
...l (pH7.5)150μl,2.5倍体积的95%乙醇，置液氮中15min或-20℃过夜。15000r/min，离心10min，真空干燥后，溶于适量三蒸水中，即为纯化的探针，-20℃备用。 使用闭环或线性双链质粒DNA，或分离的双链DNA片段均可进行此法标记，全质粒标记敏感性较高，因为标记物可同时掺入载体DNA。 此法也可用于放射性同位素和地辛标记DNA法。
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