酶标抗体与荧光色素标记抗体不同,它需借助桥-偶联剂的作用,将酶连结在抗体分子上。偶联剂是一种双功能试剂,具备3个基本特征:①偶联剂与抗体和酶之间的连结,必须是不可逆的,即借共价键连结;②偶联剂不应影响酶和抗体的活性;③不能因偶联剂的加入,使酶与组织成分了生非特异结合。 在HRP标记抗体中,常用的偶联剂有戊二醛、过碘酸钠及Maleimide等,现简介如下。 1...
Roitt等(1956)和Witebsby等(1957)就发现桥本氏病 人血 清中有对甲状腺提取的抗体活性,后来White(1957)首次用间接免疫荧光染色方法研究桥本氏病人血清存在对甲状腺胶质(thyroidcolloid)的抗体获得成功。此后,Landing等(1958)和Holbrow等(1959)以不固定的甲状腺切片作抗原。检查出慢性甲状腺炎(Chr...
...贫血 36 甲状腺功能亢进 24 甲状腺功能低下 55 糖尿 病 18 肝炎 37 Odger等(1968)发现恶性贫血病人胃粘膜内含IgA细胞减少到正常的10%,IgM细胞减至50%,而IgG细胞则增加至15%,后者选择性的出现在残余的壁细胞周围。Baur等(1968)用人胃粘膜匀浆中微粒体部分标记荧光素和9例恶性贫血病人胃粘膜切片反应,其中7例PCA阳性...
...组分的含量不一定相同,故有多个抗原决定簇,能与非特异性反应抗原NCA、NCA-2和正常胎儿粪抗原等发生交叉反应。NCA存在于正常肺、胰腺、粒细胞、单核细胞及巨噬细胞内,也存在于正常肠粘膜、胃粘膜肠化生腺体细胞及 胆汁 内。临床血清学检查CEA对 结肠癌 、 肺癌 、 胰腺癌 、 胃癌 及其它腺上皮性恶性肿瘤等的诊断有较大价值。免疫细胞化学研究可以明确CEA的...
用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果 1.免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100~10-7系列稀释的抗原,斑点直径0.25cm, 空气中干燥,80℃多聚甲醛蒸气固定1h,然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥抗联接胶体铁标记物的间接法染色,普鲁士蓝呈色观察。一步法所难检测到的抗原量为10-2~10-3μg,间接法 敏感性至少增...
1.Marsshall 氏法 (1)材料:抗体球蛋白溶液、0.5mol/l pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25~50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等。 (2)方法及步骤: ①抗体的准备:取适...
...min。 (3)切片用PBS洗2次,每次5min。用电磁搅拌或振荡帮助洗净不参与反应的血清蛋白。吹干。 (4)滴加抗人IgG或γ-球蛋白荧光抗体(用0.01%伊文氏蓝稀释)覆盖切片,37 ℃ 中放置30min。 (5)用PBS洗2次,方法同步骤(3),随后,再用蒸馏水洗1min。 (6)缓冲甘油(pH9.0~9.5,PBS或碳酸盐缓冲液1份和1份甘油混合)封...
抗横纹肌自身抗体出现在50%以上的肌 无力 症和 胸腺瘤 病人,正常人未发现。属IgG类抗体,用间接免疫荧光法检测此抗体,准确简便。 1.抗原切片取人或大白 鼠骨 骼肌,沿肌纤维平行方向作冰冻切片,不固定。 2.间接法免疫荧光染色方法染色的方法步骤与其他自身抗体间接法相同,但在荧光抗体染色之后,要延长PBS洗涤时间,3次PBS洗涤,每次30min。封裱切片。...
在抗体生成过程中,对TD抗原的应答已证明是由Mφ、T系细胞和B系细胞相互作用的结果,那么Mφ直接呈递抗原的对象是T细胞还是B细胞?或者二者都是?就现有资料分析,它们可能存在着Mφ与T的相互作用,T与B的相互作用以及Mφ与B细胞之间的相互作用。
从理论上讲,用细胞化学方法能显示的酶,均可用于标记抗体,进行ICC染色,但实际上在ICC中所能用的酶并不多。现将常用的几种酶列于表4-1,供选用时参考。 表4-1 免疫细胞化学常用的酶 名 称 分 子 量 内 源 性 商 品 Horseeradish peroxidase(E.C.1,11,1,7) 40~45KD + 有 Alkaline phosphat...
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