载脂蛋白分离纯化后,获得了所需要的纯品,该纯品纯度及其品种可通过下述方法进行鉴定。 一、免疫电泳法 免疫电泳法既可用于鉴定蛋白种类,又可鉴定其纯度。 制备1%的琼脂糖,以0.1mmol/L巴比妥缓冲液(0.05μ,pH8.6)为溶剂,制作一块约7×4cm的大小,厚度为0.2~0.3cm的琼脂糖凝胶,以 玻璃 板或薄膜为支持物,于凝胶正中打孔(直径0.2cm)...
...弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1:32,最佳抗原浓度为1:16。效价在1:8以上即可采用于一般试验。 (三)其他鉴定方法 有时,因抗原特殊,沉淀线不易出现,特别是制备的抗血清将用于某种试验时,则考虑用其它方法(如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等)测定其效价。 二、抗血清的保存 抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存,将...
用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果 1.免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100~10-7系列稀释的抗原,斑点直径0.25cm, 空气中干燥,80℃多聚甲醛蒸气固定1h,然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥抗联接胶体铁标记物的间接法染色,普鲁士蓝呈色观察。一步法所难检测到的抗原量为10-2~10-3μg,间接法 敏感性至少增...
动脉粥样硬化 病灶 主要涉及两类血管细胞即血管内皮细胞和中膜平滑肌细胞(SMC),本节主要就这两类细胞进行讨论,介绍一般培养和鉴定方法。 一、血管内皮细胞的培养方法和特性 人和动脉不同部位、不同血管如大动脉与小动脉、毛细血管,以及静脉血管之间存在差异,在处理这些细胞时应分别对待。血管内皮细胞形态较小,近似圆形,呈均匀排列,一般取材于人和动物的 脐带 。 1....
...的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大,因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离纯化,才能达到获得纯品的目的。有关文献报导,目前分离纯化载脂蛋白方法和仪器种类很多,而常用的方法包括四个步骤即:①分离脂蛋白;②脱脂获得脂蛋白中的载脂蛋白部分即ApoHDL、ApoVLDL、ApoLDL等;③将各种载脂蛋白进一步纯化而获得免疫纯或单点纯;④鉴定或定量。
...弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1:32,最佳抗原浓度为1:16。效价在1:8以上即可采用于一般试验。 (三)其他鉴定方法 有时,因抗原特殊,沉淀线不易出现,特别是制备的抗血清将用于某种试验时,则考虑用其它方法(如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等)测定其效价。 二、抗血清的保存 抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存,将...
...的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大,因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离纯化,才能达到获得纯品的目的。有关文献报导,目前分离纯化载脂蛋白方法和仪器种类很多,而常用的方法包括四个步骤即:①分离脂蛋白;②脱脂获得脂蛋白中的载脂蛋白部分即ApoHDL、ApoVLDL、ApoLDL等;③将各种载脂蛋白进一步纯化而获得免疫纯或单点纯;④鉴定或定量。
动脉粥样硬化 病灶 主要涉及两类血管细胞即血管内皮细胞和中膜平滑肌细胞(SMC),本节主要就这两类细胞进行讨论,介绍一般培养和鉴定方法。 一、血管内皮细胞的培养方法和特性 人和动脉不同部位、不同血管如大动脉与小动脉、毛细血管,以及静脉血管之间存在差异,在处理这些细胞时应分别对待。血管内皮细胞形态较小,近似圆形,呈均匀排列,一般取材于人和动物的 脐带 。 1....
...氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出 光子 (hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原 (化学发光免疫分析) 或 抗体 ( 免疫化学 发光分析) 上, 或酶作用于发光 底物 。 化学发光免疫分 析法 以标记方法的不同而分为两种: ...
对制备的McAb进行系统的鉴定是十分必要的,应做下述几个方面的鉴定: 1.抗体特异性的鉴定 除用免疫原(抗原)进行抗体的检测外,还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验,方法可用ELISA、IFA法。例如:①制备抗 黑色素瘤 细胞的McAb,除用黑色素瘤细胞反应外,还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应,以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克...
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