探针 是一小段 单链 DNA或者RNA片段（大约是20到500bp）， 用于检测与其互补的 核酸 序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用 放射性同位素 （通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如 辣根 过氧化物酶）标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种 核苷酸 之一的 磷酸基 团中，而 荧光染料 和酶与核酸序列以 共价键 相连。 当将探针与样品杂交时...
...时抽查切片，镜检其显色情况。 （2）缓冲IV（10mmol/l Tris –HCl, 1mmol/L EDTA, pH8.0）10min终止反应，甲绿复染5min，二甲苯透明，DPX封固，镜检。 （二）荧光标记DNA探针的应用 1．概述在原位杂交细胞化学中荧光标记DNA探针（Fluorescence in situ DNA hybridisa－tion , ...
...杂交法检测特定基因组序列，进行RFLP分析用于基因诊断，菌落原位杂交，噬菌斑原位杂交，固定细胞及中期染色体原位杂交以及生物体液中，组织中病毒DNA序列的检测。这一技术还被应用于检测DNA标记物及测序，对 人类 染色体连锁图谱进行构建和基因图谱分析。 （二）基本操作步骤 组织处理及预杂交等步骤与本章 中叙述的放射性同位素标记cRNA探针相同，但由于地高辛标记c...
...以及传统鉴别方法已无法满足鉴别的需要。随着各种先进仪器以及分子生物学的发展，各种新的鉴别方法亦纷纷推出，如红外光谱鉴别、化学指纹图谱鉴别以及DNA分子标记鉴别等，中药材鉴别领域显示出了蓬勃的生机。 近年来，以PCR为基础的DNA分子标记鉴别技术在中药材真伪鉴别中发挥了重要的作用，同时，在多基源品种的鉴别及道地药材鉴别中也崭露头角，显示出了巨大的前景。以 人参...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP，多用缺品平移法、末端标记法，随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时，同时掺入标记的脱氧核苷酸，制出cD－NA标记探针。
...见光照射下，芳基叠氮化合物可能变成活化芳基硝基苯，很易与DNA或RNA的腺嘌呤N—7位置特异结合，大约每50个碱基结合一个生物素，所以只用于标记大于200个核苷酸的片段。光敏生物素的醋酸盐很易溶于水，与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点：方法简便易行，快速省时，不需昂贵的酶和dUTP等；只需光照，探针稳定，-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RN...
...对 RNA 而言），一般能有效抑制DNA 酶活性 。第三，DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如 缺口平移 法、随机 引物 法、PCR标记法等，能用于 同位素 和非同位素标记。 （二）cDNA探针 cDNA是指互补于mRNA的DNA 分子 （complementary DNA）。cDNA是由RNA经一种称为 逆转录酶 的DNA 聚合酶 催化 产生...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP，多用缺品平移法、末端标记法，随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时，同时掺入标记的脱氧核苷酸，制出cD－NA标记探针。
...，而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同，通过氢键在几十、几百甚至上千个位点上的结合。因为有机溶液可降低杂交体的稳定性，所以，疏水反应对互补核酸链的结合也有一定的作用，但对其特异性影响甚微。 核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍可能进行碱基配对，这取决于修饰的部位和修饰的性质。这一特性有助于理解非放射性核酸探针标记物的设计和125I与DNA探...
英国的研究者称，干细胞移植后进行定量的反转录多聚酶链反应（RT－PCR）有助于慢性髓细胞性的进一步治疗。 伦敦Hammersmith 医院的Eduardo Olaverria 及其同事解释说：“RT－PCR已经广泛地应用于异基因干细胞移植后微小残留病变的监测。然而，此类研究大多采用的是定性RT－PCR，解释得出的结果是相矛盾的。” Olaverria 等采用...
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