...碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是放射性同位素标记。常用的放射性同位素有32P和35S前者能量高，信号强，最常用。放射性同位素标记探针虽然敏...
生物素标记的核苷酸是最广泛使用的一种，如生物素-11-dUTP，可用缺口平移或末端加尾标记法。实验发现生物素可共价连接在嘧啶环的5位上，合成TTP或UTP的类似物。在离体条件下，这种生物素化dUTP可作为大肠杆菌多聚酶I（DNA酶I）的底物掺入带有缺口的DNA或RNA，得到生物素标记的核酸探针。这种标记方法称为缺口平移法。用标记在DNA上的生物素与链霉亲合素...
目前的研究指出，用免疫细胞化学检查病 人血 清中的dsDNA抗体为作为 系统性红斑狼疮 的诊断依据之一。佐佐木毅等和徐世玉等发现一些临床症状和血清学检查不典型的 红斑狼疮 病人，在发病早期就出现抗dsDNA抗体，认为这可能有助于早期诊断。 1．用马疫锥虫抗原检测抗dsDNA抗体方法 （1）底物制备：用马疫锥虫感染小鼠2～4天后，取小鼠的外周血，按血液细胞计数...
1．白细胞抗原 下面给出世界卫生组织对白细胞抗原的统一命名，以及它们的分子量、对应的单克隆抗体及反应阳性的细胞（见表10-2）。 表10-2 WHO对白细胞分化抗原的命名 抗原 分子量 单克隆抗体 反应阳性细胞 CD 1 P45/12 Leu 6 ,T 6 ,O KT 6 胸腺细胞、朗格罕细胞 CD 2 P50 Leu 5 B,T 11 ,OKT 11 E ...
放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法，随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中，制成标记探针，敏感度高于化学修饰法，但操作程...
为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞125I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用125I）标记LDL后，与细胞（通常为培养的单层成纤维细胞）、组织或含有LDL-R的制剂一起孵育，使LDL-R与125I-LDL充分结合，形成受体-配体复合物，再除去未结合的1...
...7.4缓冲液，22℃，25min，同上过Sephadex G-50，收集蛋白A峰。 （3）取0.77mg/ml的PE和0.27mg/ml蛋白A等量混合，22℃反应6h，混合物4℃保存备用。 以上两种PE标记制品，可最后溶于0.01mol/l pH7.4PB(含有0.1mol/l DETA、1mol/L碘乙酰胺、1%BSA 和0.1%NaN3),0～5℃保存。
...至48μl，加DNA聚合酶（SABC）8u，混匀，37 ℃ ，2h，加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl，终止反应。 在随机引物标记体系中，加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%)，发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。Bio-11-Dutp/dTTP（%）比值为35%时，其标记率最高，显色灵敏度达0.2pg，杂交灵敏度...
放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法，随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中，制成标记探针，敏感度高于化学修饰法，但操作程...
为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞 125 I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用 125 I）标记LDL后，与细胞（通常为培养的单层成纤维细胞）、组织或含有LDL-R的制剂一起孵育，使LDL-R与 125 I-LDL充分结合，形成受体-配体复合物，再除...
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