恶性淋巴瘤 总的可分为非何杰金 淋巴瘤 (NHL)与何杰金氏病两大部分。NHL的免疫功能分类繁多。总体上各类型的瘤细胞的免疫细胞化学标记与相应的正常细胞标记相一致。但是由于瘤细胞的基因有变异,分化不正常,其抗原性也发生变化。因此瘤细胞比相应正常细胞的表达要弱或丧失。在此不分型描述,而从应用角度分为下列三方面进行讨论:
荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上可靠的。随着技术科学的发展,在不同程度上采用客观指标记录判断结果,如用细胞分光亮度计,图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果,也必须结合主观的判断。 荧光显微镜摄影技术对于记录荧...
...序进行锇酸后固定, 脱水 ,包埋,切片和观察。此法利用HRP免疫反应产物具有极高电子反应密度体积大小不一,加之非特异性反应产物常掩盖微细结构的背景,不易达到准确的定位。现在比较广泛应用的是生物素-蛋白A(PA)胶体金(gold)标记技术。用于原位杂交的电镜定位,取得较为满意的效果。其基本原理是利用生物素标记探针与细胞或组织进行原位杂交后,利用抗生物素抗体-结...
...)90ml,混合后,校定pH至9.0。 【附三】3%重碳酸钠水溶液配法:称1.5g无水重碳酸钠充分溶解于50ml灭菌蒸馏水中即成。 4.透析标记法 此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少。 (1)用0.025mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中。 (2)用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml...
... 近年来,为提高敏感性和减低非特异性染色,有些学者(Cammisuli 1976; Jassani 1981;Falini 1983)在常规免疫细胞化学技术的基础上,发展了半抗原交联抗体法,可作免疫荧光或免疫酶染色。本法的基本原理是应用半抗原标记第一抗体。常用的半抗原有阿散酸,即对氨基苯砷酸(Arsanilic acid, ARS),对氨基苯酰甘氨酸(P—a...
胶体铁的等电点为7.8至7.9,在pH7.4时通过离子键能与抗体IgG(pH5.8~7.3)结合而不影响抗体活性,在此条件下,Seno'对Hale'胶体铁进行了抗体标记,并成功用于免疫细胞化学染色(Seno,et al.1989),抗体标记时,用0.1mol/L碳酸钾将胶体的pH调至7.4按每毫升脱体铁0.2~1mg的蛋白量,将IgG在电磁搅拌下逐滴加入到胶...
...子相连,构成Dig-配基标记的核酸探针。将这种标记的探针与组织、细胞或染色体原位核酸分子之间的同源序列在一定条件下互补杂交,然后用偶联有酶或荧光素的羊抗高地辛抗体Tab(抗原结合片段)结合物作为酶标或荧光标记,再分别用显色底物使杂交部位显色或产生荧光以达到检测目的,其反应过程见图20-3。 图20-3 地高辛标记的探针检测酶联免疫反应 常用的免疫酶学检测方法...
(一)cRNA探针的同位素标记 1.标记液(转录标记) 2.转录缓冲液 ※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。 3.标记终止液 4.标记探针水解液 先用dH 2 O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。 5.探针水解时间 注:L O -探针初始长度(kb) L f -探针的终长度(kb) K-0.11kb/min 6.探针水解终止...
一、免疫荧光或免疫酶标技术在肾脏疾病中的应用的意义
(一)血液中红细胞与白细胞比例约600~1000:1,两者的比重不同其沉降速度亦异,通常用两种方法加以分离。 本法是利用血细胞自然沉降率的分离法,采集血液后应及时抗凝,通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶,从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30~60min后,血液分成明显三层,上层为淡黄色血浆,...
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