免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons等(1950)建立,经过近43年的发展,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与亲合化学技术如 葡萄 球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激光技术、电子计算机和扫描电视等技术结合发展为定量免疫荧光细胞化学技术;荧光激...
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ,近年来,凝集素电镜标记技术应用日益广泛,且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多,常用的有凝集素—酶(常用为HRP)、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术(包埋前染色)简介如下(Sterit 和Kreatzberg,1987)。 (1)固定:常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织,...
1.原理常规的G带显带技术,在 人类 染色体中仅观察到320~450条带纹,对于一些染色体细微结构异常的识别是不够的。 氨甲碟呤抑制二氢叶酸还原酶,阻止叶酸转变为四氢叶酸,从而干扰了脱氧胸腺嘧啶核苷酸的合成,阻止了DNA的复制,使细胞被阻止在S期内。胸腺嘧啶核苷解除氨甲喋呤的作用,让被阻滞的细胞同时开始进行DNA复制,进而同步分裂;放线菌素D可增加染色体的长...
1.葡聚糖凝胶的某些技术数 据 种类 干颗粒直径(μ) 分子量分级范围 床体积毫升/克干分子筛 得水值 溶胀最少平衡时间(h) 柱头压力(kPa)(2.5cm直径柱) 肽及球形蛋白质 葡聚糖(线性分子) 室温 沸水浴 Sephadex G-10 40~ 120 ~700 ~700 2~ 3 1.0±0.1 3 1 Sephadex G-10 40~ 120 ...
该技术方法是用生物素分别标记抗体和酶,然后以抗生物素为桥,把两者连接起来(图6-2)。 图6-2B RAB技术 检查抗原时,先用生物素标记的抗体与细胞(或组织内)的抗原反应,洗去未结合的抗体,加入抗生物素孵育后,洗去未结合的抗生物素,再加入已标记酶的生物素孵育,洗片,以细胞化学方法呈色反应。
自1969年以来,我们高兴的看到原位杂交免疫细胞化学技术已从分子生物学的一个分支发展成为生命科学的有效的研究方法。在原位杂交免疫细胞化学发展过程中两个关键性的突破是核酸探针制备的标记物的改进。核酸探针由克隆的核酸探针发展到无克隆的合成的寡核苷酸探针;从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是,这一技术还处于不断的改进和更新的过程中。
...因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料,发挥了其它技术难以取代的作用。近年来,此一技术的应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用 3 H标记的核酸RNA探针与DN...
70年代以来,由于免疫组织化学方法的广泛应用,在技术方法上不断得以改进,涌现了一批新的技术方法,其特点为一些具有双价或多价结合力的物质如如植物凝集素(Lectin)、生物素(Biotin)和 葡萄 球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A, SPA)等被应用于免疫细胞化学技术,从而建立了SPA—HRP法、ABC法、BRAB法和LAB法等。...
以生物素标记抗体作第一抗体,酶标记抗生物素作为第二抗体(图6-3)。操作步骤如下: 图6-3 LAB技术 (1)切片在含有25~50μg/ml生物素标记抗体(PBS液稀释)中孵育1h,室温。 (2)PBS洗2次,每次5min。 (3)用20~50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。 (4)酶呈色反应。 BRAB法和LAB示是Guesdo...
免疫金银技术(Immunogold—sliver Technique)是在免疫金基础上发展的新兴的先进的免疫细胞化学检测技术,它比免疫荧光,免疫酶标技术有许多独特的优点。 1.制备方法简单,易行。 2.标记简单 抗体、凝集素、酶、SPA、激素等很容易通过物理吸附作用与胶体金颗粒相结合形成稳定的金标复合物。由于在标记过程中不需要经过任何化学方法交联,抗体的生物...
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