组织化学（histochemistry）和细胞化学（cytochemistry）技术是通过化学或物理反应原理显示组织切片细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。如糖类、脂类、酶、核酸等与试剂发生化学物理反应，形成有色终末产物，在光镜下观察，有的可在电镜下观察。 1．糖类显示多糖和蛋白多糖的常用方法是过碘酸－雪夫反应（periodic acid...
...床表现与发展过程有别于血管肉瘤。其由恶性短梭形细胞组成，间以许多间隙，内有红细胞，新近Guarda等报道梭形细胞第Ⅷ因子阳性，但也有阴性。有的作者认为该肿瘤来源于淋巴管内皮的可能性大于血管内皮。Barsky指出，应用抗基底膜抗体可以区别血管与淋巴管，后者缺乏。 （四）双向分化的 软组织肿瘤 免疫细胞化学标记 这里的双向分化是指有纤维性与上皮性两种瘤细胞为主构...
...der首先用生物素标记的rDNA及UI探针，在 蜂蝇 （Drosophila）卵巢，应用Lowicryl-K4M低温包埋的切片上进行原位分子杂交，以蛋白A和胶体金复合物作为显示系统，较好的保存了组织的形态学结构和较高的信噪比例。Webster等人（1986）应用生物素标记探针显示了细胞内mRNA的分布。Singer等（1989）成功的用双标记原位杂交技术，一...
...der首先用生物素标记的rDNA及UI探针，在 蜂蝇 （Drosophila）卵巢，应用Lowicryl-K4M低温包埋的切片上进行原位分子杂交，以蛋白A和胶体金复合物作为显示系统，较好的保存了组织的形态学结构和较高的信噪比例。Webster等人（1986）应用生物素标记探针显示了细胞内mRNA的分布。Singer等（1989）成功的用双标记原位杂交技术，一...
（1）将整封染色体铺片放置于金网上，在70%的酒精蒸汽固定4～15h，空气干燥。 （2）以强碱使DNA变性，将金网置于2×SSC内（应用0.1n NaOH调整至pH12），室温，2min。 （3） 脱水 ，以70%和95%酒精各冲洗3次，空气干燥。 （4）杂交，金网覆于平面 玻璃 皿（ Petri dish）内的杂交液滴上，每滴约10～15μl，将此小碟置于...
...（6）PBS冲洗2×3min。 （7）0.25%乙酸酐（0.1mol/L 三乙醇胺配）10min。 （8）2×SSC冲洗10min。 （9）杂交：如是cDNA探针用前需进行变性处理，载片法时将切片在空气中晾干，加含探针的杂交液10μl于切片上，盖上22×22mm的硅化盖片或相当大小看蜡膜， 3 H标记探针每10μl杂交液含1×10 5 cpm探针， 32 P...
目前应用原位杂交方法中，信号的显示主要有放射自显影，酶底物及免疫金银等方法，在此归纳有关的主要试剂。 1．A-B显影液 称取上述试剂，按配方分别溶于50ml ddH 2 O中，于显影前，在室温将两者（A液及B液）按1：1混合，稍加摇动促进混合，即可将贴有切片标本的切片放入显影液，于室温避光（可暗室）反应5～15min。显影时间和温度相关，需自己根据情况摸索。...
...成本高外，关键是操作复杂，重复性差，仅能半定量。成本高可随经济发展而缓和，但其它缺点尚需努力克服。 杂交实验的 探针 应具有特异性，对应不同的杂交方法靶 基因 （被检基因）应有一定的纯度与丰度。 杂交反应 的开始是碰撞，探针浓度高则速率增加，一般 32 P标记探记探针5-100ng/ml，非 放射性 探针25-1000ng/ml， 原位杂交 无论放射还是非放...
...中。固相杂交有菌落原位杂交（colony in situ hybridization）、斑点杂交法（Dot blot）、Southern印迹杂交（Southern blot）、Northern印迹杂交（Northern blot）和组织原位杂交（Tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交免疫细胞化学技术。液相...
...可同时混合孵育切片，这是因为抗地高辛抗体只有Fab段，而没有Fc段。我们知道抗体的抗原决定簇在Fc段，因此第二抗体与第一抗体的结合是第二抗体的Fab与第一抗体的Fc，所以第一抗体如果只有Fab段没有Fc段，那么第二抗体就无法与一抗结合。因此实验中将二种抗体混合孵育切片而不会产生交叉结合。以下为此法的原理图（图20-5）。 图20-5 原位杂交细胞化学与免疫细...
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