...2各90ng，模板DNA0.1μg,[α- 32 P]dCTp 1.5×10 6 Bq，dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤： （1）变性：反应管在95℃水浴5min，然后离心； （2）退火：37℃水浴2min； （3）延伸：加入DNA聚合酶i 1u，37℃水浴18min。重复上述变性、退火、延伸过程1～2次，分别进行其标...
...10ng，多至3μg的DNA。能在新合成的DNA链每20～25个核苷酸，掺入一个Dig-dUTP，反应时间约为1h。 2．杂交 按标准杂交方法进行。可以采用尼龙膜或硝酸纤维素膜。用过的杂交液可冻存于-20℃，重复使用。 3．免疫学检测 封阻后，检测反应的第一步，抗体结合物与标记DNA结合，出现杂交的半抗原-标记DNA，显色反应起始是在碱性pH条件下加入无色的...
生物素- 补骨脂 素是另一种生物素光敏物质，在长波长紫外线照射下与嘧啶碱基发生光化学反应，加成到DNA中，去除小分子后，得到生物素标记核酸探针。此法可标记单链或双链DNA或RNA，及寡核苷酸。灵敏度与放射性探针相当。标记方法：取DNA或片段0.5μg加50μlTE（pH8.0）缓冲液中，再加入5μlg生物素- 补骨脂 素，溶解后，置365nm紫外光下直接照射...
...类 如血蓝蛋白、铁蛋白等。 2．病原体类 如 烟草 花叶 病毒、南方菜豆花叶病毒、噬菌体T 4 、大肠杆菌f 2 、噬菌体等。 3．金属颗粒胶体金、免疫金银标记技术和同位素放射性自显影的银颗粒等。其中以金属类颗粒标记物应用最为广泛。最常用的是胶体金，胶体金商品提供的直径从3～150nm不等，扫描免疫电镜常用的金颗粒直径在30～60nm左右为宜。由于金本身系重...
...DNA上的一个片段作为DNA引物，以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，通过变性，退火和延伸过程，使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行，总体积为25μl，内含50mmol/l Tris—HCl pH7.5, 10mmol/L MgCl 2 、BSa 5mmol/L、80ng引物DNA和0.1μg连接的DNA或0.1μg...
...l (pH7.5)150μl,2.5倍体积的95%乙醇，置液氮中15min或-20℃过夜。15000r/min，离心10min，真空干燥后，溶于适量三蒸水中，即为纯化的探针，-20℃备用。 使用闭环或线性双链质粒DNA，或分离的双链DNA片段均可进行此法标记，全质粒标记敏感性较高，因为标记物可同时掺入载体DNA。 此法也可用于放射性同位素和地辛标记DNA法。
一、凝集素电镜标记技术
光敏DNP由一连接臂组成，一端是2，4-二硝基苯，另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同，检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法：（1）DNA不心变性，必须溶于水中，取2～10μg10μl，加入二甲亚砜25μl，每微克DNA加入光敏DNp 2μg（在避光条件下），混匀。（2）置入冰浴中，在特制灯10cm下照...
...～0.5mol/L氯化钠/PBs 30～60min。 ④PBS—BSA冲洗5min×3。 3．免疫标记与透射免疫电镜的原则及步骤基本相同。 免疫金银染色法举例（张留保等，1997） （1）血细胞以PBS—BSA冲洗5min×3。 （2）2%多聚甲醛—戊二醛混合液固定，4 ℃ ，1h （3）PBS或TBS反复冲洗5min×3。 （4）胶体金免疫标记程序（略） ...
...的.溶胶是物质存在的一种特殊状态,而不是一种特殊物质,不是物质的本性.任何一种物质在一定条件下可以 晶体 的形态存在,而在另一种条件下却可以胶体的形态存在.例如, 氯化钠 是典型的晶体,它在水中溶解成为真溶液,若用适当的方法使其分散于苯或醚中,则形成 胶体溶液 .同样, 硫磺 分散在 乙醇 中为真溶液,若分散在水中则为硫磺水溶胶. 由于胶体体系首先是以分散相...
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