（一）基本原理 应用DNA探针缺口翻译（nick translation）方法，通过碱基配对以一条DNA链为模板，将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。显示方法有二种：一种是用HRP显示，类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法，利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平...
...F2 TC 、 半抗原 如 地高辛 、生物素、 酶类 如 辣根 过氧化物酶（HRP）、 半乳糖苷酶 或 碱性磷酸酶 （ AKP ）等，不同的标记物，所标记探针的方法及检测方法也各异。 核酸探针的常用酶促标记技术有： 缺口平移 ； DNA 快速 末端标记 ；用 T4 多核苷酸 酶标记 DNa5'末端，随 引物延伸 ； 聚合酶链反应 。 核酸探针的非放射性标记技...
...引物可用小牛胸腺DNA或鱼精DNA制备。 用随机引物法标记的DNA探针或cDNA探针比活性显著高于缺口平移法，且结果较为稳定。这种方法尤其适用于真核DNA探针，因为随机引物来自真核DNA，其与真核序列的退火率要高于原核序列。因此，对于克隆的DAN探针，常先将插入探针DNA切下来回收后再标记，而缺口平移法可直接用于全质粒的标记。 5．聚合酶链反应（详见第二十二...
...：金属如Hg、荧光物质如F2TC、半抗原如地高辛、生物素、酶类如 辣根 过氧化物酶（HRP）、半 乳糖 苷酶或碱性磷酸酶（AKP）等，不同的标记物，所标记探针的方法及检测方法也各异。 核酸探针的常用酶促标记技术有：缺口平移；DNA快速末端标记；用T4多核苷酸酶标记DNa5'末端，随引物延伸；聚合酶链反应。 核酸探针的非放射性标记技术有：光促生物素标记核酸、酶...
...用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。 放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种： （1）液相法：将待检标本（例如含 胰岛素 抗原）与定时的 同位素标记 的胰岛素（抗原）和定时的 抗胰岛素 抗体混合，经一定作用时间后，分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原，测定这两部分的放射活性，计算结合率。在反应系统中，待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战 性与 胰岛素抗...
...mmol/l dATP/dGTP dCTP各1μl，按不同比例加入Bio –11-Dutp,和dTTP，用三蒸水补足体积至48μl，加DNA聚合酶（SABC）8u，混匀，37 ℃ ，2h，加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl，终止反应。 在随机引物标记体系中，加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%)，发现二者比值明显影响探针标...
RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上，在许多优点。它们是单链，不需变性，也没有互补链的干扰，与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T 3 和T 7 RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法：其下列反应体积为50μl：40mmol/l Tris HCl pH8.0、8mmol/l MgCl 2 、2mmol/L亚精胺、...
...A片段。将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定，亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。因此要得到一种特异性DNA探针，常常是比较繁琐的。探针DNA克隆的筛选也可采用血清学方法，所不同的是所建DNA文库为可表达性，克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原，然后用来源细菌的多克隆抗血清筛选阳性克隆，所得到多个阳性克隆再经其它细菌的抗血清筛选，最后只与本细菌抗血清反应...
典型PCR反应混合物中，所用酶浓度为2.5U/μl，常用范围为1～4U/100μl。由于DNA模板的不同和引物不同，以及其它条件的差异，多聚酶的用量亦有差异，酶量过多会导致非特异产物的增加。 由于生产厂家所用兵配方、制造条件以及活性定义不同，不同厂商供应的TaqDNA聚合酶性能也有所不同。 Cetus公司酶定义是：1个酶单位是指在以下分析条件下，于74℃，3...
...本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。 放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种： （1）液相法：将待检标本（例如含胰岛素抗原）与定时的同位素标记的胰岛素（抗原）和定时的抗胰岛素抗体混合，经一定作用时间后，分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原，测定这两部分的放射活性，计算结合率。在反应系统中，待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战 性与胰岛素抗体结合。...
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