噬菌体λ是最主要的一种载体。自从1974年以来,已用野生型λ改造和构建出一系列噬菌体载体。 噬菌体λ是温和噬菌体。基因组是长约50kb的双链DNA分子。在噬菌体λ颗粒中,DNA是线状双链分子带有单链的互补末端。末端长12个核苷酸,这称为粘性末端,简写COS。当噬菌体感染宿主细胞后,双链DNA分子通过COS而成环状。在感染早期,环状DNA分子进行转录。在此期间...
...抗药性质粒,又称R质粒,带有R质粒的细菌就能在相应的抗生素存在生存繁殖。所以质粒对宿主不是寄生的,而是共生的。医学上遇到许多细菌的抗药性,常与R质粒在细菌间的传播有关,F质粒就能促使这种传递。 图20-2 pBR322及pUC18图谱 现在分子生物学使用的质粒载体都已不是原来细菌或细胞中天然存在的质粒,而是经过了许多的人工的改造。从不同的实验目的出发,人们设...
将目的基因或序列插入载体,主要靠DNA连接酶和双链DNA粘末端单链序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。
质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆,然后再引入真核细胞。目前病毒载体常用者有改造来自猴肾病毒SV40(Simian Virus 40)、逆转录...
将目的基因或序列插入载体,主要靠DNA连接酶和双链DNA粘末端单链序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。
...人们的意愿去有目的地改造,创建生物遗传性,因此其最基本的工程就是要得到目的基因或核酸序列的克隆。分离或改建的基因和核酸序列自身不能繁殖,需要载体携带它们到合适的细胞中复制和表现功能。对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求: ①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。 ②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。 ③容易插入外来核酸片段,插入...
...感染细菌的一类病毒,有的噬菌体基因组较大,加入λ噬菌和T噬菌体等;有的则较小,如M13、f1、fd噬菌体等。用感染大肠杆菌的λ噬菌体改造成的载体应用最为广泛。 λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,而将其蛋白质外壳留在菌外。DNA进入...
... CoA重合成脂肪酸是由含有多种酶的 复合体 进行的,而在它的 酰基 缩合的阶段,酰基CoA不是作为直接 底物 ,而是被转移至复合体中的酰基载体蛋白起反应的。ACP在动物或 酵母 中不易从酶复合体 解离 出来,但在 大肠杆菌 则可被分离,分子量为8847,由77个 氨基酸残基 组成。4′- 磷酸 泛酸巯基乙胺 与蛋白质部分的 丝氨酸 以脂键结合(P.R.Va...
离子载体 (ionophore) 离子载体是一些能够极大提高膜对某些离子通透性的载体 分子 。大多数离子载体是 细菌 产生的 抗生素 ,它们能够杀死某些微生物,其作用机制就是提高了 靶细胞 膜通透性,使得靶细胞无法维持细胞内离子的正常浓度梯度而死亡,所以离子载体并非是自然状态下存在于膜中的运输 蛋白 ,而是人工用来研究膜运输蛋白的一个概念。根据改变离子通透性...
...人们的意愿去有目的地改造,创建生物遗传性,因此其最基本的工程就是要得到目的基因或核酸序列的克隆。分离或改建的基因和核酸序列自身不能繁殖,需要载体携带它们到合适的细胞中复制和表现功能。对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求: ①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。 ②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。 ③容易插入外来核酸片段,插入...
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