(一)抗体的荧光素标记 用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。作为标记的荧光素应符合以下要求:①应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的...
补体是机体重要的免疫效应系统之一。补体系统活化可以溶解细胞,在活化过程中产生的中间复合物及某些片段也具有多种多样的生物活性;所以补体系统结机体的作用是多方面的,既可参与机体的防御效应和自身稳定,亦可引起免疫损伤。 (一)溶细胞作用 不论何种途径活化,补体系统都能对其粘附的细胞产生溶解作用。在经典活化途径中,抗体的作用只是特异性地定位靶细胞和活化补体,而靶细胞...
一、生物学检测法 TNF的主要生物学活性之一就是对某些肿瘤细胞的细胞毒作用。根据这一特点,可利用TNF敏感的靶细胞测定TNF活性,根据细胞死亡得出TNF的相对活性。该法的关键是选择敏感特异的靶细胞。靶细胞可以是长期传代培养的细胞系,也可以是新鲜分离的原代细胞(如瘤细胞)。现以贴壁生长的L929细胞为例,简述TNF活性的检测原则。 两种TNF均可伤体外培养的L...
免疫球蛋白具有蛋白质的通性,能被多种蛋白水解酶裂解;可以在乙醇、三氯醋酸或中性盐类中沉淀,常用50%饱和硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中提取抗体球蛋白。血清电泳时免疫球蛋白主要分布于γ区,因而以往曾称抗体为γ球蛋白。其实具抗体活性的球蛋白除存在于γ区外,也可延伸到β区,甚至α 2 区,这反映了抗体由不同细胞克隆产生的不均一性和结构的多样性。自从发现骨髓瘤患者尿中的...
抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素,也是整个免疫反应的基本条件。抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件,制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。抗体有单克隆和多克隆两类。 单克隆抗体用杂交瘤技术制备(详见第十一章),多克隆抗体存在于免疫动物抗血清中。近年来又出现了基因工程抗体(单链抗体)。本章仅叙述抗原纯化和多克隆抗血清制备技术。
抗原与抗体能够特异性结合是基于两中分子间的结构互补性与亲和性,这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。抗原抗体反应可分为两个阶段。第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶段,此阶段反应快,仅需几秒至几分钟,但不出现可见反应。第二为可见反应阶段,抗原抗体复合物在环境因素(如电解质、pH、温度、补体)的影响下,进一步交联和聚集,表现为凝集、沉淀、溶解、补体结合介...
免疫复合物在体内存在有两种方式,一是存在于血液中的循环免疫复合物(CIC),一是组织中固定的免疫复合物。免疫复合物的检测技术可分为抗原特异性方法和非抗原特异性方法。在大多数情况下,免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂,所以抗原特异性方法并不常用。
IL-2的检测方法主要有两大类,一类是细胞增殖法,另一类是免疫学检测法。 (一)细胞增殖法 IL-2可刺激某些淋巴细胞增殖,根据细胞增殖情况可反映IL-2的活性,结果以U/ml表示。目前所用的IL-2反应细胞主要有CTLL、CTB6、F12、CTLL-2等小鼠IL-2依赖细胞株以及ConA活化的小鼠淋巴母细胞和小鼠胸腺细胞。这类细胞的增殖情况均可通过显微镜下...
IL-3又名多能集落刺激因子(multi-CSF),在刺激多能造血干细胞及造血前体细胞的分化及增殖方面具有重要作用。目前检测IL-3的方法多根据其对某些IL-3反应性细胞促增殖及分化作用而设计。 IL-3能刺激多种细胞增殖,因此测定IL-3反应细胞的增殖情况即可反映IL-3的活性。目前常用于细胞增殖法的IL-3反应细胞有骨髓干细胞、骨髓来源的IL-3依赖株及...
T细胞具有多种生物学功能,如直接杀伤靶细胞,辅助或抑制B细胞产生抗体,对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等,据此建立了一系列的检测方法,其中有些已用作临床检测细胞免疫功能的指标。
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