在获得特异的目的基因后,可用以下方法大量扩增制备:①用体外DNA重组技术与载体DNA相连,转化至大肠杆菌中进行无性繁殖。以氯化铯超速离心纯化重组质粒DNA,并以合适限制性内切酶消化,经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应(Poly-merase chain reaction, PCR)扩增技术:利用这种先进技术能简便快速制备大量特异性目的核酸...
核酸分子的固相杂交是将待测核酸样品结合在某种固相支持物上,然后与溶液中的标记探针进行杂交。目前使用最多的固相支持物是硝酸纤维膜。这里重点介绍直接点样技术,转移技术及其它常用的杂交技术。 (一)斑点杂交的直接点样法 斑点杂交或叫打点杂交(dot-blot hybridization),其主要特点是事先不用限制内切酶消化或用凝胶电泳分离核酸样品,操作简便,灵敏度...
...Cl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。 c:蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中纯化得到。该酶有两个Ca 2+ 结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去Ca 2+ ...
...发展。 为了便于了解和选购适宜的PCR实验设备,现将部分国内外PCR扩增仪列表如下(表22-5);这些仪器主要用变温铝块、变温水浴及变温气流的方式达到热循环的目的,各有其优缺点。国产1109型DNA扩增仪则是用恒温浴机械手移位式。更接近于手工操作。PTC-51A/B体积小,智能化与自动化程序高,可以兼做套式PCR,方便实用。以上各种仪器一般都配有微电脑自动控...
...狄森氏病)病人。用间接免疫荧光法检测,阳性率约50%,其他自身免疫病阳性率2%~5%。 1.抗原切片抗原用新鲜肾上腺尸检或手术切除标本,常用 皮质醇增多 症(柯兴氏病)病人手术切除的肾上腺。或取猴肾上腺组织,作冰冻切片。不需固定。 2.间接免疫荧光检查方法 3.荧光显微镜检查可见特异性荧光在皮髓质连接区最清晰,定位于皮质网状带细胞胞浆,髓质细胞不与抗体反应。
colchamiro报道,科学家发现了一种样病毒攻击细胞的方式与hiv类似,这将是hiv研究中的突破。(science 1999,286∶1968) 这预示着可建立新的治疗hiv的方法,这一发明也使人们相信最初用来预防 天花 的少量基因突变的方法现在也可能使人们对hiv产生免疫力。 圣佛朗西斯科加利福尼亚大学howard hughes医学研究所的lalani...
在肾脏疾病时,免疫细胞化学技术主要应用于肾脏穿刺组织的检查,也可应用于血清或肾脏洗脱液及尿液的特殊检查,兹分述如下:
核酸的多核苷酸链在次级键的基础上,还可形成更为复杂的二级及三级的高级结构。
一、免疫荧光或免疫酶标技术在肾脏疾病中的应用的意义
免疫细胞化学在病理学中的应用最为广泛,并取得了很大成果。
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