酶标抗体技术是通过共价键将酶连结在抗体上,制成酶标抗体,再借酶对底物的特异催化作用,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,于光镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位。
标记过多或过少荧光素的抗体分子可用DEAE-纤维素柱层析法除去。方法如下: DEAE-纤维素柱的装柱,洗脱、再生方法等与提纯IgG方法相同。装柱所需DEAE-纤维素量以干重每克交换20~50mg标记蛋白量为宜。常用梯度洗脱法如下: (1)层析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡,标记物上柱后,先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脱,洗出无色或淡绿色...
1.原理这个方法用酰化剂3--(4-羟苯基)丙酸—N 琥珀 酰胺酯(Bolton—Hunter试剂)做连接试剂,将 125 I标记在羟苯基的2,5位置上,再将 琥珀 酰胺酯水解,通过一个酰氨键将3--(4—羟基—5— 125 I—苯基)接在蛋白或多肽的末端氨基上。 2.方法 125 I—Bolton—Hunter试剂可用氯胺T法自行制备,出已有该试剂的苯溶液...
...抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的,应用的结合物是酶标记的,称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验(dotymmunogoldfiltrationassay,DIGFA),又名滴金免疫测定法(简称滴金法)。在滴金法中不需酶对底物的反应,...
应用免疫电子显微镜技术(常用为PAP法或胶体金标记技术)可显示抗原在神经细胞内的超威结构定位及在突触水平神经元间的联系的化学本质。Pickel应用免疫电镜观察证明TH存在于DA和DA能神经元的细胞体、树突和近侧轴突。在胞体内此酶定位于内质网、Golgi器和微管上。神经终末枝的突触小泡一般认为是神经递质的亚细胞贮存部位,在电镜下观察神经末梢内突触小泡呈现不同形...
SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记,应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术,后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA在PAP法中可代替桥抗体。 1.SPA—HRP用于间接法的操作步骤 (1)切片经脱蜡后用0.5%H2O2—纯甲醇液处理5min以抑制内源性过氧化物酶活性。 (2)用Tris盐酸缓冲液(...
...察,称 免疫荧光 术。如抗体与 辣根 过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)等结合,进行酶显示后,可在光镜或电镜观察,用于电镜者则称为免疫电镜术(immunoelectronmicroscopy)此外,以铁蛋 标记抗体白标记抗体,称 铁蛋白 标记法,也能用于电镜下观察。 标记抗体与抗原结合方式 标记抗体与抗原结合方式主要有两种...
又名 三钾二枸橼酸铋 (tripotassium dicitrate bismuthate, 枸橼酸铋钾 ),溶于水形成 胶体溶液 。本品不抑制胃酸,在胃液pH条件下能形成氧化铋 胶体 沉着于 溃疡 表面或基底 肉芽组织 ,形成保护膜而抵御胃酸、 胃蛋白酶 、酸性食物对溃疡面刺激。也能与胃蛋白酶结合而降低其活性。还能促进粘液分泌。用于胃、十二指肠溃疡、疗效与...
胶体化学是研究胶体分散系-物理化学性质的一门科学。它不仅和工农业生产有着密切的关系,而且和生命科学紧密相关。在研究动植物的生命现象时,随处都会遇到胶体体系。从胶体化学的观点来说,人体就是典型的胶体体系。因为细胞、血液、淋巴液、肌肉、脏器、软骨、皮肤、毛发等都属于胶体体系。因此,生物体内发生的许多生理变化和病理变化与胶体的性质有联系。另外,许多药物、消毒剂、 ...
... 3 H标记探针4~8周, 35 S标记探针1~4周, 32 P标记探针7~10天。 (27)D 196 显影液,20℃显影5~10min。 (28)自来水冲洗数秒。 (29)F 5 坚膜定影液10min。 (30)自来水冲洗15min。 (31)切片温箱烤干,脱水,透明,封片。 结果:蛋白或多肽免疫反应阳性细胞为棕色胞质,而其相应mRNA为黑色银颗粒聚集。
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