...′→3′方向移动，这种反应叫做缺刻平移(nick translation)，利用此反应可在体外对DNA片段进行放射性磷(α-32PdNTP)的标记制成探针(probe)，进行核酸的分子杂交实验，是现代分子生物学的一项重要技术(图16－11)。 图16-11 缺刻平移标记DNA探针 许多实验证实DNA polⅠ并不是DNA复制过程中的主要酶，它的作用主要与DN...
...构互变、 脱氨 基、碱基修饰、DNA链上的碱基脱落等。外界 射线 的照射等 物理因素 ， 烷化剂 、碱基类似物、修饰剂等 化学 因素都能损伤DNA的结构，变化包括有相邻 嘧啶 共价 二聚体 的形成、碱基、脱氧核糖和 磷酸基 团的烷基化和其它修饰、碱基脱落、DNA 单链 断裂、双链断裂、DNA链内交联、链间交联、DNA与周围的 蛋白质 交连等。最后能导致DNA...
...14N培养基中培养代数的增加，低密度带增强，而中密度带逐渐减弱，离心结束后，从管底到管口，CsCl溶液密度分布从高到低形成密度梯度，不同重量的DNA分子就停留在与其相当的CsCl密度处，在紫外光下可以看到DNA分子形成的区带。为了证实第一代杂交分子确实是一半15N-DNA－半14N－DNA，将这种杂交分子经加热变性，对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯...
...用地高辛标记rRNA探针在Lowicryl-K4M包埋的切片进行杂交，然后以抗地高辛等抗体结合胶体金颗粒进行显示，以银显示法加强获得极为满意的定位。总之，电镜水平的原位分子杂交技术在国外还处在不断提高和改进的阶段，在国内此一技术还刚起步。焦仁杰等（1992）报告了以生物素标记腺病毒的基因组探针与整装抽提的细胞进行电镜原位杂交技术，成功地证明了腺病毒DNA与核...
DNA存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，因此维护DNA分子的完整性对细胞至关重要。外界环境和生物体内部的因素都经常会导致DNA分子的损伤或改变，而且与RNA及蛋白质可以在胞内大量合成不同，一般在一个原核细胞中只有一份DNA，在真核二倍体细胞中相同的DNA也只有一对，如果DNA的损伤或遗传信息的改变不能更正，对体细胞就可能影响其功能或生存，对生殖细胞则可能...
DNA 复制的研究最初是在 原核生物 中进行的，有些原核生物的DNA复制已经搞得很清楚。 真核生物 比原核生物复杂得多，但DNA复制的基本过程还是相似的。在这里我们主要讨论一些重要的区别。 图16－16 端粒酶催化端区TG链的合成 1.与原核生物不同，真核生物DNA复制有许多起始点，例如 酵母 S.cerevisiae的17号 染色体 约有400个起始点，因...
...。这个杂交方法已用于 乙肝 病毒、 沙眼 衣原体、淋球菌以及质粒抗性的检测，敏感性达到能检测5×10 4 双链DNA分子。 4．复性速率液相分子杂交这个方法的原理是细菌等原核生物的基因组DNA通常不包含重复顺序。它们在液相中复性（杂交）时，同源DNA比异源DNA的复性速度要快。同源程度越高，复性速率和杂交率越快。利用这个特点，可以通过分光光度计直接测定变性D...
...slation)，利用此反应可在体外对 DNA 片段进行 放射性 磷 (α-32PdNTP) 的标记制成 探针 (probe)，进行 核酸 的 分子杂交 实验，是现代分子 生物学 的一项重要技术 (图 16－11)。 图 16-11 缺刻平移标记 DNA 探针 许多实验证实 DNA polⅠ并不是 DNA 复制过程中的主要酶，它的作用主要与 DNA 损伤后的...
一、DNA探针的应用
...行准确地自我复制(self??replication)，使DNA的量成倍增加，这是细胞分裂的物质基础。1953年Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型指出，DNA是由二条互补的脱氧核苷酸链组成，所以一条DNA链上的核苷酸排列顺序是由图16-1双螺旋DNA的复制另一条决定的。这就说明DNA的复制是由原来存在的分子为模板来合成新的链。曾经有过多种关于D...
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