...定位。总之,电镜水平的原位分子杂交技术在国外还处在不断提高和改进的阶段,在国内此一技术还刚起步。焦仁杰等(1992)报告了以生物素标记腺病毒的基因组探针与整装抽提的细胞进行电镜原位杂交技术,成功地证明了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系,胶体金颗粒呈簇状与串珠状结合在核骨架上。向正华等(1994)应用地高辛标记探针结合HRP的包埋前染色法显示了POMc mR...
...定位。总之,电镜水平的原位分子杂交技术在国外还处在不断提高和改进的阶段,在国内此一技术还刚起步。焦仁杰等(1992)报告了以生物素标记腺病毒的基因组探针与整装抽提的细胞进行电镜原位杂交技术,成功地证明了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系,胶体金颗粒呈簇状与串珠状结合在核骨架上。向正华等(1994)应用地高辛标记探针结合HRP的包埋前染色法显示了POMc mR...
一、基本原理
...—HCl/PBs 30~60min。 ③0.1~0.5mol/L氯化钠/PBs 30~60min。 ④PBS—BSA冲洗5min×3。 3.免疫标记与透射免疫电镜的原则及步骤基本相同。 免疫金银染色法举例(张留保等,1997) (1)血细胞以PBS—BSA冲洗5min×3。 (2)2%多聚甲醛—戊二醛混合液固定,4 ℃ ,1h (3)PBS或TBS反复冲洗5...
在连续的超薄切片上进行,用包埋后染色法在相邻的两张切片上分别以不同的抗体进行免疫染色。可在超威结构水平判定细胞内抗原共存的情况。
(1)将整封染色体铺片放置于金网上,在70%的酒精蒸汽固定4~15h,空气干燥。 (2)以强碱使DNA变性,将金网置于2×SSC内(应用0.1n NaOH调整至pH12),室温,2min。 (3) 脱水 ,以70%和95%酒精各冲洗3次,空气干燥。 (4)杂交,金网覆于平面 玻璃 皿( Petri dish)内的杂交液滴上,每滴约10~15μl,将此小碟置于...
...地黄 皂甙液中1~2min,能有助于增强细胞膜的穿透性,使标记抗体液进入细胞内。 2.免疫反应处理 常用包埋前染色,分直接法和间接法两种。在染色前,将组织切成约10~20μm厚的薄片。 (1)直接法:将薄片直接浸泡于标记抗体液中,室温或37℃作用1~2h或更长;缓冲液(有人提倡用冷缓冲液)浸漂,除去未结合的标记抗体溶液,然后转入常规双固定和电镜包埋。 (2)...
...源 应用免疫电镜可清晰显示 乙肝 病理在肾小球及肾小管的分布部位及数量,以及确定其在细胞内之位置(胞浆内或胞核内)和与在上皮下或内皮下沉积之免疫复合物间的关系。目前并 可利用分子生物学技术鉴别乙肝病毒有无复制,从而深入探讨乙肝病毒相关性肾炎的发病机制。 3.研究肾小球内沉积之免疫复合物的组成成分及其形成过程 应用不同大小胶体金颗粒标记多种免疫球蛋白,以显示肾...
(一)基本原理 在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后,科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似,首先利用地高辛修饰核酸探针,与细胞或组织进行杂交,再用抗地高辛抗血清相连胶体金与之结合,进行细胞或组织特异核苷酸的超威结构定位。为增强金的显示效应,可用银加强法增强...
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展...
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