抗体产生细胞胞浆内含有相对多的抗原,故采用直接或间接法免疫细胞化学技术可简化步骤,节 省时间,降低成本。为了清除组织间弥散的免疫球蛋白,我们在固定前用PBS浸洗,取得良好的效果。用双标记免疫荧光技术可以在同一张切片上显示出两种不同的抗体产生细胞。 1.组织加工根据研究目的的内窥镜直视下钳取胃、小肠或结肠粘膜。将取得的组织立即放入含4 ℃ ,pH7.2、0.0...
染色试验(MBD)是诊断 弓形虫病 的可靠和敏感的方法,其在早期感染即出现阳性,并能维持1年之久,但该试验需用活的弓形虫,一般的医学检验室不易进行。补体结合试验阳性反应出现在病程后期并转阴较快,与染色试验结合使用有参考价值,皆因操作繁琐而为间接血凝、荧光抗体和酶免疫吸附测定等法所取代。一些新的测抗体的方法在国内使用尚不普遍。本文主要介绍点免疫金渗滤法。
染色试验(MBD)是诊断 弓形虫病 的可靠和敏感的方法,其在早期感染即出现阳性,并能维持1年之久,但该试验需用活的弓形虫,一般的医学检验室不易进行。补体结合试验阳性反应出现在病程后期并转阴较快,与染色试验结合使用有参考价值,皆因操作繁琐而为间接血凝、荧光抗体和酶免疫吸附测定等法所取代。一些新的测抗体的方法在国内使用尚不普遍。本文主要介绍点免疫金渗滤法。
1.组织固定和加工 用冰冻组织切片可直接进行溶菌酶免疫细胞化学研究。用冷酒精固定,4%福尔马林缓冲液或1.5%戊二醛固定均能进行免疫细胞化学染色。但浸蜡时温度不能超过60 ℃ ,载玻片应涂薄层 明胶 以防组织切片脱落。载片后,组织切片应放在50~56 ℃ 的烤箱中干燥但不能放在底层,因烤箱底层温度不均匀。组织切片应避免接触含油类的手和容器。组织块应放在4℃密...
1.组织加工 有人提出用冰冻切片进行CEA免疫细胞化学染色。由于非特异性荧光和需要一定设备条件,有人改用福尔马林固定和胰酶消化的方法。从我们的体会看,福尔马林固定后的切片CEA的部分抗原决定簇被遮盖,阳性结果显着受到影响。但是用冷酒精固定后的组织切片,CEA的阳性率明显升高,而且结果仍很清晰。goldenbery等同时进行CEA酶标记组织,而福尔马林固定的组...
...羊血 清封闭组织37℃ ,30min。 (3)分别以第一抗体孵育组织,4℃24h,PBS振洗10min×3; (4)用胶体铁标记的第二抗体37℃孵育30min或用桥抗联接胶体铁标记物; (5)蒸馏水洗; (6)以1%的亚铁氰化钾与1%盐酸混合液显色20in; (7)自来水洗 ; (8)核固红染核, 脱水 ,透明、封片。 以该方法染色,阳性为蓝色,胞核为红色。
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待...
...再置于4 ℃ 24~36h。 (7)PBS漂洗3min,3次。 (8)PBS(内含1%的 牛血 清白蛋白)pH8.2中,5min,此步为胶体金结合作准备。 (9)胶体金标记抗体液1:30~1:100,淡红色为适宜稀释液,室温孵育10min至1h。 (10)双蒸水洗3min,3次。 如作双重染色,则应将镍网翻过来,用另一类抗体血清,重复上述步骤(2)~(10)...
...的抗FITC抗体与组织抗原结合的FITC的反应,呈色后观察抗原存在部位。FITC为一种荧光色素,荧光显微镜下呈亮绿色荧光,所以也可以同时观察免疫荧光染色结果。FITC特异荧光褪色后,其抗原性仍不丢失,从这种角度讲,荧光抗体法的切片亦能半永久保存。该法较一般间接法敏感性高,最大优点是不管第一抗体来自何种属,只要与FITC连结,均可被同一酶标记的抗FITC抗体识...
应当根据设备条件,具备的抗体和示踪抗原的特点进行选择。我们的经验是:因胞浆性抗原含量较多,可以用简便和廉价的间接法甚至直接法免疫细胞化学染色;对膜抗原及其它一些微量抗原应当选用PAP或ABC法,如果同时进行两种以上抗原的检查,最好进行双标记和多标记免疫细胞化学染色;为了显示较弱的抗原,可以用对比染色技术,背景为另一种颜色,使阳性抗原着色更突出。
所有搜索结果仅供参考,如需解决具体问题请咨询相关领域专业人士。