双向凝胶电泳 的原理是第一向基于 蛋白质 的 等电点 不同用 等电聚焦 分离,第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂 蛋白 混合物中的蛋白质在二维平面上分开。近年来经过多方面改进已成为研究 蛋白质组 的最有使用价值的核心方法。 分离蛋白质组所有蛋白的两个关键参数是其分辨率和可重复性。在目前情况下,双向凝胶电泳的一块胶板(16cm×20cm)可分...
血浆中蛋白质种类繁多,对各种单一蛋白进行快速而又特异的定量。目前公认的方法是免疫测定法,即利用其特异的抗体,采用测定抗原抗体复合物的方式定量。血浆(清)中载脂蛋白是以脂蛋白形式存在的少量蛋白,在解联剂作用下,使载脂蛋白从脂蛋白中分离出来,再利用相应的载脂蛋白抗体进行测定。 载脂蛋白的免疫测定方法很多,目前采用的方法各有其特点,所需条件也有差异,现将医学检验中...
免疫蛋白为大分子蛋白质,具备抗原的各种性质,对异种、同种异体,甚至宿主自身都是良好的抗原,而且是一个抗原复合体,带有多种抗原决定簇。Ig分子的这种异质性反映了抗体形成细胞的遗传性差异,代表抗体分子在不同水平上的遗传变异性;通常可用血清学方法检测出来,并据此将Ig及其肽链(H和L链)分成不同的血清学类型。 需要指出的是,在正常状态下,1个Ig分子的2条H链是均...
研究载脂蛋白的前提条件是必须得到各种载脂蛋白的纯品,然而各种载脂蛋白的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大,因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离纯化,才能达到获得纯品的目的。有关文献报导,目前分离纯化载脂蛋白方法和仪器种类很多,而常用的方法包括四个步骤即:①分离脂蛋白;②脱脂获得脂蛋白中的载脂蛋白部分即ApoHDL、ApoVLDL、ApoLD...
(一) 醋酸纤维素 薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的 羟基 乙酰 化形成的纤维素 醋酸 酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对 蛋白质 样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的 缓冲液 也少,电泳时电流的大部分由样品 传导 ,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少,5μg的蛋白质可得到满意的分离...
表12-39 实验动物血清脂蛋 白及 其成分 [60] 实验动物 脂蛋白(毫克/100毫升) 蛋白含量% 总脂质的重量百分比% 游离胆固醇 胆固醇酯 甘油三酯 磷酯 狗 β 86 24 1 2 6 3 α2 99 35 1 3 2 7 α1 758 50 4 23 8 40 兔 β 99 17 3 8 16 10 α2 59 42 1 3 3 8 α1 27...
免疫蛋白为大分子蛋白质,具备抗原的各种性质,对异种、同种异体,甚至宿主自身都是良好的抗原,而且是一个抗原复合体,带有多种抗原决定簇。Ig分子的这种异质性反映了抗体形成细胞的遗传性差异,代表抗体分子在不同水平上的遗传变异性;通常可用血清学方法检测出来,并据此将Ig及其肽链(H和L链)分成不同的血清学类型。 需要指出的是,在正常状态下,1个Ig分子的2条H链是均...
血浆中蛋白质种类繁多,对各种单一蛋白进行快速而又特异的定量。目前公认的方法是免疫测定法,即利用其特异的抗体,采用测定抗原抗体复合物的方式定量。血浆(清)中载脂蛋白是以脂蛋白形式存在的少量蛋白,在解联剂作用下,使载脂蛋白从脂蛋白中分离出来,再利用相应的载脂蛋白抗体进行测定。 载脂蛋白的免疫测定方法很多,目前采用的方法各有其特点,所需条件也有差异,现将医学检验中...
免疫电泳为区带电泳与免疫双向扩散的结合,是由Grabar和Williams(1953)首先报道的。方法是先利用区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内分离开,然后与电泳方向平行在两侧开槽,加入抗血清。置室温或37℃使两者扩散,各区带蛋白在相应位置与抗体反应形成弧形沉淀线(图12-8)。根据各蛋白所处的电泳位置,可分为白蛋白区、球蛋白α1区、α2区、β...
研究载脂蛋白的前提条件是必须得到各种载脂蛋白的纯品,然而各种载脂蛋白的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大,因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离纯化,才能达到获得纯品的目的。有关文献报导,目前分离纯化载脂蛋白方法和仪器种类很多,而常用的方法包括四个步骤即:①分离脂蛋白;②脱脂获得脂蛋白中的载脂蛋白部分即ApoHDL、ApoVLDL、ApoLD...
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