以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿...
原位杂交组化(ISHH)与免疫组织化学(IHC)结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色,这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原,从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。ISHH与IHC结合法可以在相邻切片上分别进行ISHH和IHC染色,也可先后在同一切片上进行ISHH和IHC染色。前者可使I...
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待...
Merkel细胞系1975年Merkel在真皮交界处发现的一种比周围基底细胞淡染的细胞,此种细胞与神经髓鞘接触,认为是触觉细胞,并发现其能促进所有特化的感觉功能所接受和传导,这种功能不需触觉小体或环状小体介导。后来在电镜下观察到Merkel细胞内含神经内分泌颗粒,组织化学和免疫组化观察到其含有与神经组织有关的酶如特异性乙酰胆硷酯酶三磷酸核苷酶、神经特异性烯醇...
...A不能区别是起源于大汗腺或小汗腺。CEA染色不仅可研究肿瘤的发生,还可用于显微镜下的外科手术,用以快速判断肿瘤组织是否切除干净。因Paget细胞也含有CEA,因此也是鉴别Paget氏病的Paget细胞与皮肤原位癌中Paget样细胞以及 恶性黑色素瘤 中的Paget样瘤细胞的一种简单易行的方法。此外,CEA也存在于胎儿的小汗腺中,因此,可作为汗腺分化的最早标志...
...缔组织、脂肪组织、肌肉、血管、滑膜、周围神经以及骨组织等。本节 研究的对象为来源于这些组织的肿瘤,与一些与之相关但组织发生尚不太明了的肿瘤的免疫细胞化学标记。软组织恶性肿瘤虽然只占人体全部恶性肿瘤的1%左右。但由于这类肿瘤形态很相似。在常规切片下确定其组织发生,常是临床病理诊断中的难题之一,为病理工作者所关注。由于免疫细胞化学的发展,研制成许多标记抗体,提供...
(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。 (2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2,加入1mmol/l MgCl 2 蒸馏水洗洗3min×3,离心沉集细胞。 (3)将细胞团置于小纸板上,入液氮冷却的Freon中,取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作,再于-100 ℃ 蚀刻1min 。 (4)制做断裂面复型。 (5)再次氯酸钠清洗复型,蒸馏水洗后进行观察...
一、时间分辨荧光免疫测定
用消化道切片结合免疫细胞化学染色固然能显示壁内神经丛的神经细胞及纤维。但由于壁内神经丛为扁平的网状结构,欲窥其全貌,则以消化道全层铺片技术进行免疫细胞化学染色效果最佳。消化道全层铺片在英文文献中通常称为whole mount stretch preparation,即整装撕片。即根据消化管壁内神经丛的结构特点,分纵层肌、环层肌、粘膜下层等分层撕开铺片,以暴露...
凝集素可为荧光素、酶和生物素等所标记,分别进行下列染色法: 1.直接法 标记物直接标记在凝集素上,使之直接与切片中的相应糖蛋白或糖脂相结合。 (1)切片脱蜡至水。 (2)凝集素标记物(100μg/ml),室温,30min。 (3)TBS洗3次,每次2min。 (4)如为荧光素标记物,封片用荧光显微镜观察。如为酶标记物,则应依次进行呈色、 脱水 、透明和封固后...
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