...A与胶体金或铁蛋白相结合,可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。特别是蛋白A—胶体金技术(Protein A—Gold technique, PGA技术)自Pomano和Romano(1977)首次报告用于标记细胞表面抗原、包括淋巴细胞、血小板、大 鼠肾 脏细胞及感染的病毒细胞获得成功以后,已得到愈来愈广泛的应用(详见第七章 ),是一种较为理想的免疫电镜技术。
...的抗原)结合,形成抗原-抗体-荧光抗体的复合物。由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗全显著多于直接法,从而提高了敏感性。如细胞抗原上每个分子结合3~5个分子抗体,当此抗体作为抗原时又可结合3~5分子的荧光抗体,所以和直接法相比荧光亮度可增强3至4倍。此法除灵敏性高外,它只需要制备一种种属间接荧光抗体,可以适用于多种第一抗体的标记显示。这是现在最广泛应用的技术。
1.材料 (1)免疫血清60℃灭活20min,用Kolmers 盐水作2倍稀释成1:2,1:4,1:8……。补体用1:10稀释的新鲜豚鼠血清,抗补体荧光抗体等,按下述的补体法染色。免疫血清补体结合的效价,如为1:32则免疫血清应作1:8稀释。 (2)补体用新鲜豚鼠血清一般作1:10稀释或按补体结合反应试管法所测定的结果,按2单位的比例,用Kolmers盐水稀...
...±1.1μg/mg细胞蛋白,FH杂合子为5.2±0.8μg/mg细胞蛋白,FH纯合子0.9±0.2μg/mg细胞蛋白。 图20-1 直接荧光法测LDL-R操作步骤 亦有用胶体金标记LDL的,但是在受体-配体结合分析法中,正常人与FH患者的测定值有较明显的交叉现象,且操作比较繁琐。 1987年Roach等比较了在硝化纤维素上用 125 I-LDL、生物素-LD...
...后,关闭电源,置凝胶板于10.0%三氯醋酸液固定15~20min,取出胶板,在黑色背景灯光下量取沉淀峰高度,如图18-3所示。 图18-3 免疫火箭琼脂糖电泳图 7.计算 (1)查标准曲线。 (2)按下式计算: 8.如果需要也可将凝胶板置0.9% NaCl液漂洗过夜更换蒸馏水漂洗,底板衬以硬薄膜,尔后置染色液染色,脱色后可见明显的沉淀峰,干燥,以便长期保存。
用各种方法提纯单一成分的抗原是产生单价特异性抗体的最主要条件。近代免疫化学技术(免疫吸收法)和柱层析法等提供了很大的可能性,可参考有关专着。
...说明书),用微量加样器每份标本加1孔。加样量10μl。置湿盒(水平位置)37℃扩散24h,测沉淀环直径,如图18-2所示。 图18-2 单向免疫扩散图(0.8%琼脂糖) 4. 标准曲线的制备(参考方法) (1)参考血清稀释法:取Apo含量标准参考血清用盐水稀释成梯度浓度。ApoAⅠ:20、40、60、80、100mg/dl,同上法操作加样,每一稀释浓度应在两...
光化学与免疫法 (一)光化学治疗(puva) 补骨脂 素或其衍生物加紫外线可作用于表皮内与受损细胞邻近尚未完破坏或正常的黑素细胞,刺激这些细胞的功能,使酪氨酸酶催化黑素的合成,促进黑素细胞的分裂和移动,致使白斑的色素逐渐恢复。白斑的色素再生还常常始于毛球部黑素细胞的增殖,随后沿毛囊转移到漏斗部,最后在邻近角朊细胞内离心性扩散。可用 补骨脂 素(psorale...
...±1.1μg/mg细胞蛋白,FH杂合子为5.2±0.8μg/mg细胞蛋白,FH纯合子0.9±0.2μg/mg细胞蛋白。 图20-1 直接荧光法测LDL-R操作步骤 亦有用胶体金标记LDL的,但是在受体-配体结合分析法中,正常人与FH患者的测定值有较明显的交叉现象,且操作比较繁琐。 1987年Roach等比较了在硝化纤维素上用 125 I-LDL、生物素-LD...
免疫化学方法是利用抗原与其相应抗体具有特异结合的特性,用荧光素、酶、发光素、同位素、胶体金标记某种抗原的抗体,借助荧光显微镜、电镜、图像分析仪、同位素监测仪、分光亮度仪便可对组织中的抗原进行定性或定量,可用于胶原、蛋白多糖、弹性蛋白、粘连蛋白、血浆成分的定位和定量分析。 1.抗原提取及单克隆抗体的制备(从略)。 2.抗体的标记:基本原理是将抗体与标记物以共价...
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