原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐,实验周期长。国外Liesi等(1986)和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素(Biotin-streptavidin)胶体金系统进行原位杂交,得到了快速满意的结果,全部实验可在数小时内完成。 作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒,按照第十九章 在光照下标记光敏生物素,然后经DNA酶消化1h,得到...
原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞定位。这一技术为研究单一细胞中编码各处蛋白质、多肽的相应mR...
在肾脏疾病时,免疫细胞化学技术主要应用于肾脏穿刺组织的检查,也可应用于血清或肾脏洗脱液及尿液的特殊检查,兹分述如下:
凝集素可为荧光素、酶和生物素等所标记,分别进行下列染色法: 1.直接法 标记物直接标记在凝集素上,使之直接与切片中的相应糖蛋白或糖脂相结合。 (1)切片脱蜡至水。 (2)凝集素标记物(100μg/ml),室温,30min。 (3)TBS洗3次,每次2min。 (4)如为荧光素标记物,封片用荧光显微镜观察。如为酶标记物,则应依次进行呈色、 脱水 、透明和封固后...
原位杂交组化(ISHH)与免疫组织化学(IHC)结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色,这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原,从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。ISHH与IHC结合法可以在相邻切片上分别进行ISHH和IHC染色,也可先后在同一切片上进行ISHH和IHC染色。前者可使I...
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待...
用免疫细胞化学可以观察肿瘤病毒和细胞,病毒抗原和肿瘤抗原之间的互相关系。如在不能查出 传染病 毒的肿瘤细胞中发现了病毒抗原;在典型的 肉瘤 细胞胞浆中发现了劳斯(Rous)氏肉瘤病毒;对EB病毒与非洲 淋巴瘤 、 鼻咽癌 和 白血病 等的关系进行了有价值的研究,并发现了与Eb 病毒感染有关的两类抗原,调查了某些疾病病人和正常 人血 清中抗EB病毒抗体的分布情...
一、正常黑素细胞
原位杂交组织化学(In situ hybridization histochemistry, ISHH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞定位。这一技术为研究单一细胞中编码各处蛋白质、多肽的相应mR...
用免疫细胞化学方法可以检测任何一种细菌和病毒,其突出的优点是快速、敏感、简便,又能同时进行形态学鉴定。此外,它还可更广泛地使用已知抗原间接法检查血清中抗体帮助诊断。更多地应用单克隆抗体进一步提高特异性和应用的广泛性。
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