（一）基本原理 应用DNA探针缺口翻译（nick translation）方法，通过碱基配对以一条DNA链为模板，将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。显示方法有二种：一种是用HRP显示，类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法，利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平...
根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术，免疫酶细胞化学技术，免疫铁蛋白技术，免疫金-银细胞化学技术，亲和免疫细胞化学技术，免疫电子显微镜技术等。近些年来，核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针，和免疫细胞化学技术密切结合，发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术，各具有独特的试剂和方法，但其基本技术方法是...
体液中Cl以离子形式存在，几乎全与Na+平衡增减。测定Cl-的方法有多种。 ⒈滴定法 ⑴Molrr法：以K2CrO4为指示剂，用AgNO3滴定血清中Cl-，以过量的Ag+与CrO42-结合出现Ag2CrO4红色沉淀为终点，根据AgNO 3 消耗量计算出标本中Cl - 的量。 ⑵Sehales法：以二苯卡巴腙作指示剂，用Hg(NO 3 ) 2 滴定血清中Cl ...
引言中已强调了仅在一定条件下 酶反应 速度v才和酶量成正比例。一定条件是什么？这些条件之间有无主次关系？如何选择合适的测定条件？这些都是实验室工作者在设计或选择测 酶活性 浓度方法时必须面对的问题。 首先可从理论上探讨在什么特定情况下的反应速度才可能与酶量成正比例。酶的整个反应过程可简化如下： 式中Kp可看成为ES的 解离常数 .Michaclis和Ment...
...原理，如果用高强度的放射性核苷酸（通常为α-32PdATP）置换先前存在的核苷酸，则可制备比活性高达108cpm（每分钟计数）/μg的32P标记DNA。用缺口平移法标记的DNA探针能满足大多数杂交要求。 2．DNA快速末端标记 大肠杆菌DNA聚合酶i 经枯草杆菌蛋白酶切割可得到两条多肽链，其中分子量为76kd的大片段称为Klenow片段。该酶具有完整聚合酶I...
...51 。 C退火1min，68℃延伸2min。重复上述过程15次。最后将反应管置65℃水浴5min。反应完成，加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数，参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的DNA探针特异性高，敏感性好，可测出的...
血清 胆汁酸 浓度很低（ 总胆汁酸 2μg/ml），可用气相色谱、放射免疫、 高效液相层析 法及酶学分 析法 （以3α-羟类 胆固醇 脱氢酶 为工具酶）测定NADH生成量。可以测定血清总胆汁酸（TBA），用气相色谱、放射免疫和高效液相层析尚可对 胆酸 、 脱氧胆酸 及 鹅脱氧胆酸 进行分别测定，还可进行胆汁酸负荷试验及尿中 硫酸 结合型胆汁酸的测定。 测定血...
1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检 测试 剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上，用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20～25个核苷酸中标记一个地高辛甙元，然后用抗地高辛抗体的Fab片段与碱性磷酸酶的复合物和NBt – BCIP底物显色检测，灵敏度达0.1pg DNA，因此可做1μg哺乳动物DNA...
早年进行血氧和 二氧化碳 的测定是采用经典的VanSlyke量气法。此法原理是利用皂素破坏 红细胞 ，再用铁氢化钾破坏 血红蛋白 以释放O 2 ，加辛酸去泡剂等混合液，使这一反应过程在 真空 密闭条件下进行，让 血液 中所含CO 2 、O 2 和N 2 全部释放进密封真空管的液面之上，然后测量所释气体的压力。而后又用CO 2 吸收剂 及O 2 吸收剂分别将两...
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及...
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