此法标记原理如下图所示： 标记的HRP部分催化底物化学发光反应：氨基苯二甲酰肼 氨基苯二甲酸 +N 2 +光→X-光片上感光10～20min显定影。 光亮子在酚、萘及胺类等增强剂促进下，而使光亮增强。 这种方法就是利用特殊的酶底物，氧化后把产生的能量转变为光能放出，称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂，经增强剂将光能放大，在X光片上显示杂交信号...
...位于待扩增的DNA序列两端的取向相对的DNA引物，在DNA聚合酶的介导下，经过多次变性，退火和延伸过程的重复性循环，大量合成靶DNA序列。在标记dNTP存在时，经PCR反应产生的靶DNA片段均参入了标记物，用此法标记的探针标记率高达97.4%。此法重复性好，简便、快速、特异、不要求模板DNA的纯度，可以大量制备。此法有普遍应用价值。 标记方法如下：待标DNA...
...min；三蒸水补足体积至49μl，DNA聚合酶i 5u，混匀，14℃过夜，加0.5mmol/l ED-TA(Ph8.0)1μl终止反应。 已标记探针的提纯：10mg/ml tRNA 2μl,10mmol/L Tris –HCl (pH7.5)150μl,2.5倍体积的95%乙醇，置液氮中15min或-20℃过夜。15000r/min，离心10min，真空干燥...
可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。
1．HRP标记凝集素法 适用于小量的凝集素标记（Ponder 1983）。 （1）HRP的活化 ①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中（1.25g/50ml）。 ②加50μl含1%氟二硝基苯的无水乙醇溶液，室温轻度搅拌1h。 ③加1ml含0.06mol/L的过碘酸钠的蒸馏水（0.62g/50ml），室...
...地暴露在会有潜在致癌因子的空气、饮食、日光、放射给以及人为的自然环境中，因此机体既受到危害，又与之斗争。 据估计人体总共有10至14万亿个体细胞，体细胞偶然可自发或由于上述各种致癌因子的作用发生基因变化一即基因突变。突变分子的生物学基础是使细胞遗传物质—DNA的化学结构受到损伤，即组成的DNA的碱基出现损伤、单链DNA或双链DNA断裂、DNA链间和链内的交联...
...重复上述过程15次。最后将反应管置65℃水浴5min。反应完成，加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数，参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的DNA探针特异性高，敏感性好，可测出的最低靶DNA量为10fg,利用PCR还可以作D...
近些年来，流式细胞分析技术已经成为细胞生物学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域中的一项新的有效工具。本章 主要介绍流式细胞分离及分析的基石原理、流式细胞计的基本结构和操作、流式细胞术在免疫细胞化学中应用的技术思路、途径和方法，以及它们在临床医学中的应用。对FCM在外周血白细胞的免疫组织化学分析方面的应用作重点介绍。
一、免疫金染色
...。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。 图5-2 蛋白最适稳定量示意图 （2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表5-5顺序进行。 表5-5 具...
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