...入5~20μg)溶于二甲亚砜(1mg/ml),取此溶液300μl,一滴一滴加入蛋白质溶液中,同时电磁搅拌。 (3)在室温中搅拌2h,避光。 (4)把结合物移入直径3cm,高30cm大小的Bio –Gel P-6层析柱(用0.01mol/l pH8.0的PBS平衡过),流速为1.5ml/min。 (5)收集先流出的红色结合物,即为标记抗体,分装,4℃保存备用。
...位于待扩增的DNA序列两端的取向相对的DNA引物,在DNA聚合酶的介导下,经过多次变性,退火和延伸过程的重复性循环,大量合成靶DNA序列。在标记dNTP存在时,经PCR反应产生的靶DNA片段均参入了标记物,用此法标记的探针标记率高达97.4%。此法重复性好,简便、快速、特异、不要求模板DNA的纯度,可以大量制备。此法有普遍应用价值。 标记方法如下:待标DNA...
...重复上述过程15次。最后将反应管置65℃水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的DNA探针特异性高,敏感性好,可测出的最低靶DNA量为10fg,利用PCR还可以作D...
...(V/V)甲酰胺溶于4×SSC预热37℃15~45min 。 (11)杂交:将载片上过量的甲酰胺液倾去,加20μl杂交混合液(含放射性同位素标记的探针量为5×10 3 ~ 10 6 cpm/每张载片)。覆以硅化的盖玻片,置于盛有少量5×SSC的硬塑料盒内以保持湿度,42℃孵育12~18h。为使载片不致于浸泡于SSC溶液内,通常以二根玻管(或棒)扎成担架状,载...
标记染色体 :在 肿瘤细胞 内常见到结构异常的 染色体 ,如果一种异常的染色体较多地出现在某种 肿瘤 的细胞内,就称为标记染色体,可分为特异性和非特异性标记染色体两种。如 慢性粒细胞性白血病 中的 费城染色体 即Ph小体。特异性标记染色体是指经常出现于同一种肿瘤内的标记染色体
isotope labelling 化合物 中的原子被其 同位素 ( 放射性同位素 或稳定同位素)的示踪原子所取代的标记。 取代后化合物的理化性质差异不大,也称为理想标记。
标记原子 1abe11ed atom 亦称示踪原子。是一种元素中天然含量较少或不含有的原子。示踪原子可以是 放射性 的或非放射性的 同位素 。将示踪原于引入一种 化合物 中,则后者称为示踪化合物或标记化合物。标记化合物常用于植物营养问题或 代谢 问题的研究,是一种非常有效的手段。
序列标志 位点 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是对以特定对 引物 序进行PCR特异 扩增 的一类 分子 标记的统称。通过设计特定的引物,使其与 基因组 DNA序列中特定结合位点结合,从而可用来扩增基因组中特定区域,分析其 多态性 。利用特异PCR技术的最大优点是它产生信息非常可靠,而不像RFLP和RAPD那样存在某种模糊性
...为是物理吸附性的。胶体金颗粒带有一层表面阴性电荷,与蛋白质表面的阳性电荷通过静电感应相附。因此环境pH和离子强度是影响吸附的主要因素,其他如胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量及蛋白质浓度等也会影响蛋白质的吸附。 (二)免疫金的制备 1.用0.2mol/LK 2 CO 3 或0.1mol/LHC1调节胶体金溶液的pH至选定值。原则上可选择待标记蛋白质等电点,也可...
免疫印迹法(immunoblottingtest,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzymelinkedimmunoelectrotransferblot,EITB),因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southernblot相类似,亦被称为Westernblot。免疫印迹法(图15-12)分三个阶段进行。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电...
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