（一）基本原理 应用DNA探针缺口翻译（nick translation）方法，通过碱基配对以一条DNA链为模板，将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。显示方法有二种：一种是用HRP显示，类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法，利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平...
Merkel细胞癌的组织病理诊断较困难，虽然电镜下所见的神经内分泌颗粒对诊断颇有价值，但需事先留取标本。应用免疫细胞化学技术则可于HE切片鉴别有困难后再切片染色。低分子角蛋白如CAM 5.2 、CK 5 等及上皮膜抗原呈阳性，NSE、Synaphysin Chromogranin A等阳性表明系 神经内分泌肿瘤 。通常以CAM 5.2 及NSE两种抗体一起应...
光敏DNP由一连接臂组成，一端是2，4-二硝基苯，另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同，检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法：（1）DNA不心变性，必须溶于水中，取2～10μg10μl，加入二甲亚砜25μl，每微克DNA加入光敏DNp 2μg（在避光条件下），混匀。（2）置入冰浴中，在特制灯10cm下照...
...碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是放射性同位素标记。常用的放射性同位素有32P和35S前者能量高，信号强，最常用。放射性同位素标记探针虽然敏...
细胞免疫 （cellular immunity） T 细胞 受到 抗原刺激 后， 增殖 、 分化 、转化为 致敏 T细胞(也叫效应T细胞)，当相同 抗原 再次进入机体的细胞中时，致敏T细胞（效应T细胞）对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的 细胞因子 的协同杀伤作用，统称为细胞免疫。同体液 免疫 一样，细胞免疫的产生也分为感应、反应和效应三个阶段。其作用机...
以生物素标记抗体作第一抗体，酶标记抗生物素作为第二抗体（图6-3）。操作步骤如下： 图6-3 LAB技术 （1）切片在含有25～50μg/ml生物素标记抗体（PBS液稀释）中孵育1h，室温。 （2）PBS洗2次，每次5min。 （3）用20～50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min，水洗。 （4）酶呈色反应。 BRAB法和LAB示是Guesdo...
...原理，如果用高强度的放射性核苷酸（通常为α-32PdATP）置换先前存在的核苷酸，则可制备比活性高达108cpm（每分钟计数）/μg的32P标记DNA。用缺口平移法标记的DNA探针能满足大多数杂交要求。 2．DNA快速末端标记 大肠杆菌DNA聚合酶i 经枯草杆菌蛋白酶切割可得到两条多肽链，其中分子量为76kd的大片段称为Klenow片段。该酶具有完整聚合酶I...
1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检 测试 剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上，用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20～25个核苷酸中标记一个地高辛甙元，然后用抗地高辛抗体的Fab片段与碱性磷酸酶的复合物和NBt – BCIP底物显色检测，灵敏度达0.1pg DNA，因此可做1μg哺乳动物DNA...
在细胞生物学中，一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多，只要有一个环节 失误就会影响实验结果，除了需要精制的药品外，还需要熟练的技术。那么，做成了理想的标本后，如何进行观察，才能获得尽量多的的各种定量信息，而且使这些信息能较客观的反映出来，这就是本章 的编写目的。 一、定量分...
60年代初期，人们已认识到肾小球肾炎为一种免疫性疾病，是溶血性链球菌、 葡萄 球菌等病原体侵入人体后引起的变态反应性疾病。1968年Dixon根据荧光显微镜的观察结果，提出肾小球肾炎的发病机制可分为抗肾小球基底膜性肾炎和免疫复合物性肾炎两个类型。1980年Couser根据多个学者的动物实验观察，又提出了除循环免疫复合物可沉积于肾小球内而引起肾小球肾炎外，尚可...
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