核酸外切酶 (exonuclease)在 核酸 水解酶 中,是具有从 分子 链的末端顺次水解 磷酸二酯键 而生成单 核苷酸 作用的酶,与 核酸内切酶 相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′- 单核苷酸 的酶,及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有 蛇毒磷酸二酯酶 及 大肠杆菌核酸外切酶 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等;后者有 脾脏 磷酸二酯酶 、 嗜酸乳杆菌 (...
核酸外切酶 (exonuclease)在 核酸 水解酶 中,是具有从 分子 链的末端顺次水解 磷酸二酯键 而生成单 核苷酸 作用的酶,与 核酸内切酶 相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′- 单核苷酸 的酶,及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有 蛇毒磷酸二酯酶 及 大肠杆菌核酸外切酶 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等;后者有 脾脏 磷酸二酯酶 、 嗜酸乳杆菌 (...
原位杂交术(in situ hybridization)是一种核酸分子杂交技术,它是通过检测细胞内mRNA和DNA序列片段,原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基 图1-11 大 鼠肝 大部切除后再生过程中增殖期肝细胞 摄取 3 H标记的胸腺嘧啶核苷放射自显影像 ↑ 增殖期肝细胞核 因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点,应用已知碱基...
... 碱基对 间的氢键,而使两股分开。在没有外来的不利因素,杂交和融化的过程可以重复连续下去,其中配对方法可参考 聚合酶链式反应 。最常见的是,核酸碱基对以A = T和G≡C的方式成对形成,其中后者是较稳定的(由于氢键数较多)。 变性 DNA变性,又称DNA解链或融化,是由双链 去氧核糖核酸 开旋并通过断裂分离成 单链 疏水且堆叠的单链分子。“变性”还可以指DN...
...08)+(11×15.999)=342.297。分子量范围可从2(如氢)到几百万以上(如糖类的分子量高达500000000)。 通常化合物的分子式表示了分子中原子的实际数目,在这种情况下,由分子式算出的重量就是分子量,但某些大分子 化合物 的分子式仅用经验公式表示,它只给出了分子中每种原子的比例数,这时就不能按上述方法简单计算分子量了。 当物质的分子式尚未确...
...08)+(11×15.999)=342.297。分子量范围可从2(如氢)到几百万以上(如糖类的分子量高达500000000)。 通常化合物的分子式表示了分子中原子的实际数目,在这种情况下,由分子式算出的重量就是分子量,但某些大分子 化合物 的分子式仅用经验公式表示,它只给出了分子中每种原子的比例数,这时就不能按上述方法简单计算分子量了。 当物质的分子式尚未确...
...有感染性的 烟草花叶病毒 RNA,其后又成功地从各种RNA病毒、DNA病毒中进行了提取。这些都有力地证明了决定病毒的自我 增殖 和遗传性状的仅仅是核酸 分子 。但是也有一些病毒,其单独的核酸并不具有感染性。例如 弹状病毒 ,质粒RNA对 遗传密码 来说仅是辅助性分子,质粒中必须有RNA 合成酶 起作用才能开始进行增殖过程。因此仅病毒质粒的核酸并不能完成感染。
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记,这条链就称为核酸探针。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是放射性同位素标记。常用的放射性同位素有32P和35S前者能量高,信号强,最常用。放射性同...
核酸内切酶 (endonuclease)在 核酸 水解酶 中,为可水解 分子 链内部 磷酸二酯键 生成 寡核苷酸 的酶,与 核酸外切酶 相对应。从对 底物 的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶; 脾脏 RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶。如链孢霉(Neurospora)的 核酸酶 就是既分解DNA又分解RNA的酶。一般来...
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