...Y16 HPV33 CACACAAGTAACTAGCTACAG 6628—6648 H=A+C+T，R=A+G，W=A+T，Y=C+T 2．PCR反应试剂：Taq DNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/l dNTP贮备液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、...
...科专职病理医师完成）。另取胃窦粘膜活组织村本一块，置500μlTE（10mmol/LTris.HCI.1mmol/LEDTA）（pH8.0）缓冲液中研碎，加10％SD30μl蛋白酶K（20mg/ml）3ml，55℃消化1h，以等体积苯酚—氯仿提取模板DNA用于PCR检测，标本处理程中以缓冲液做阴性对照。 统计学处理采用配对四格表资料的X 2 检验。 2 结果...
...科专职病理医师完成）。另取胃窦粘膜活组织村本一块，置500μlTE（10mmol/LTris.HCI.1mmol/LEDTA）（pH8.0）缓冲液中研碎，加10％SD30μl蛋白酶K（20mg/ml）3ml，55℃消化1h，以等体积苯酚—氯仿提取模板DNA用于PCR检测，标本处理程中以缓冲液做阴性对照。 统计学处理采用配对四格表资料的X 2 检验。 2 结果...
...．Southern印迹杂交（southern blot ）Southern blot 是研究DNA图谱的基本技术，在遗传诊断DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交基本方法是将DNA标本用限制性内切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段，然后经碱变性，Tris缓冲液中和，高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素滤膜...
...低于64，抗Ｅ不低于16，抗Ｃ不低于16，抗ｃ不低于16。 （2）5％受检者红细胞盐水悬液。 （3）1％木瓜酶（或菠萝酶〕溶液：称取木瓜酶1.0克溶解于100毫升pＨ5.5的磷酸盐缓冲液内。 （4）pＨ5.5磷酸盐缓冲液由0.067摩尔／升Na2HＰＯ45毫升、0.067摩尔／升ＫＨ2ＰＯ495毫升混合而成。 （5）已知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份。
...解红细胞，离心集取细胞核，洗除血红蛋白，再用蛋白酶/表面活性剂处理的方法来解决。另一简单的方法是煮沸之，使释放DNA，并沉淀Hb，用上清液作PCR。 现将PCR前处理各种标本的基本方法介绍如下： 1．所需溶液 （1）PBs 0.85% W/V NaCl,66mmol/L Na 3 PO 4 pH7.0 （2）含表面活性剂及蛋白酶K的PCR缓冲液 50mmol...
...双温循环是行之有效的。此时，引物延伸温度与退火温度相同。对于1kb以上的DNA片段，可根据片段长度将延伸时间控制在1～7min，与此同时，在PCR缓冲液中需加入 明胶 或BSA试剂，使Taq DNA聚合酶在长时间内保持良好的活性与稳定性；15%～20%的甘油有助于扩增2.5kb左右或较长DNA片段。 4．循环次数 常规PCR一般为25～40个周期。一般的错误...
一、免疫PCR
...理方法。 ①煮沸法：取10或20μl血清或CSF放入0.5ml微量离心管中，水浴煮10min后在冰浴中冷却，13000g离心10s，上清用作PCR分析。 ②低速离心法：将100μl羊水，血清或脑脊液加入到900μl无菌磷酸缓冲液中，10000g室温离心10min，上清转入另外的微量离心管中，20000g4℃离心1h，弃上清，沉淀悬浮于50μl 无菌水中，直接...
...法。 ①煮沸法：取10或20μl血清或CSF放入0.5ml微量 离心管 中，水浴煮10min后在冰浴中冷却，13000g离心10s，上清用作PCR分析。 ②低速离心法：将100μl羊水，血清或脑脊液加入到900μl 无菌 磷酸 缓冲液 中，10000g室温离心10min，上清转入另外的微量离心管中，20000g4℃离心1h，弃上清，沉淀悬浮于50μl 无菌水...
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