用消化道切片结合免疫细胞化学染色固然能显示壁内神经丛的神经细胞及纤维。但由于壁内神经丛为扁平的网状结构，欲窥其全貌，则以消化道全层铺片技术进行免疫细胞化学染色效果最佳。消化道全层铺片在英文文献中通常称为whole mount stretch preparation，即整装撕片。即根据消化管壁内神经丛的结构特点，分纵层肌、环层肌、粘膜下层等分层撕开铺片，以暴露...
近几年来，在PCR基础上完善和发展起来的多种基因变异检测方法是基因分析和检测的一次技术革命。其中日本学者创建的PCR-SSCP（Single-Strand ConformationPolymorphism anal－ysis of PCR products）格外重要。它是指单链DNA分子在变性PAGE中电泳迁移率随其构象的改变而改变的性质。单链DNA分子的构...
（一）肾小球疾病发病机制的研究 应用免疫荧光或免疫酶标技术，可对肾小球内免疫复合物沉积的机制、补体系统的激活途径、凝血机制的启动等进行研究，兹分述如下： 1．免疫复合物的形成及沉积的机制 有下列三种情况： （1）抗原及抗体在血液循环中结合形成循环免疫复合物沉积于肾小球：常见于毛细血管内增生性肾小球肾炎，抗原（如链球菌、 葡萄 球菌等）侵入人体后，免疫系统产生...
一、免疫PCR
以生物素标记抗体作第一抗体，酶标记抗生物素作为第二抗体（图6-3）。操作步骤如下： 图6-3 LAB技术 （1）切片在含有25～50μg/ml生物素标记抗体（PBS液稀释）中孵育1h，室温。 （2）PBS洗2次，每次5min。 （3）用20～50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min，水洗。 （4）酶呈色反应。 BRAB法和LAB示是Guesdo...
...利用HO/CA 3 双染色还可分析DNA的碱基组成。还可以结合Brdu (Bromodeoxyuridine, 溴脱氧尿嘧啶核苷)单克隆抗体免疫荧光来测定细胞内DNA合成。 2．蛋白质总量测定 用FCM可以测定细胞中蛋白的总含量，以检测一个细胞群体生长和代谢的状态，或区别具有不同蛋白含量的细胞亚群，如血液中的白细胞的分类。检测总蛋白的常用荧光探针为异硫氰基荧...
（1）胶体金液的制备，应用枸椽酸三钠还原法（见第五章 ）。 （2）待标记蛋白质和金溶液的准备，同前。注意点是用0.2mol/l K 2 CO 3 将金溶液pH调至5.9～6.2之间。 （3）确定胶体金与蛋白A的结合用量比例。取一系列盛有0.1ml胶体金液的小 玻璃 管，分别加入不同量的蛋白A，5min后，再各加0.25ml 10%的NaCl。如加入的蛋白A浓...
该技术方法是用生物素分别标记抗体和酶，然后以抗生物素为桥，把两者连接起来（图6-2）。 图6-2B RAB技术 检查抗原时，先用生物素标记的抗体与细胞（或组织内）的抗原反应，洗去未结合的抗体，加入抗生物素孵育后，洗去未结合的抗生物素，再加入已标记酶的生物素孵育，洗片，以细胞化学方法呈色反应。
...份多，则Giemsa染料不易与其结合，结果成淡染，由于整条染色体上A/T和G/C的分布不匀，这样在染色体上呈现出深浅不一的条纹或者称带纹，该技术用Giemsa染色，故其带型称为G带。 2．操作过程 （1）按常规染色体技术制片。 （2）制好的染色体玻片，在80℃烘箱中，烘烤2h，置于室温。 （3）4℃冰箱PBS液5min。 （4）4℃冰箱PBS缓冲液含胰蛋白酶...
原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐，实验周期长。国外Liesi等（1986）和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素（Biotin-streptavidin）胶体金系统进行原位杂交，得到了快速满意的结果，全部实验可在数小时内完成。 作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒，按照第十九章 在光照下标记光敏生物素，然后经DNA酶消化1h，得到...
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