（一）DNA的酶切与连接 （1）酶切反应 同质粒DNA的鉴定，只不过是质粒DNA换为载体DNA。若大量酶切，则成比例增加。 （2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。 （3）15000rpm离心15min，弃上清。 （4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃上清，真空抽干。 （5）加入适量1×TE溶解。如此可得线性...
...ucleotidyl transferase） 这是一种在反应混合物中有任何碱基存在时能使 DNA 链在3′—OH端延伸的酶。可用于 遗传 载体的构建以产生同聚物粘性尾巴，以便达到将过客DNA拼接在 质粒 上的目的过客DNA和质粒分别有如 聚腺苷酸 和聚 胸苷酸 的 互补碱基 ，因而易于退火并连接在一起，末端核苷酸转移酶在成年 骨髓细胞 中也表达，并产生 免...
...法的优点是随机性高，可是所得片段两端没有粘性末端，有时较为不便与载体连接。用 限制性核酸内切酶 酶解的随机性较差，但是两端有粘性末端,便于和载体相连接（见重组DNA技术）。 基因载体通常根据待克隆的 DNA片段长度来选择。在制作原核生物基因文库时，因基因组较小，可把 DNA片段切得短些，可选用 质粒 如pBR322等作载体。真核生物的基因内部常有称为 内含子...
...，前者不含有 组蛋白 ，基因是连续的，无 内含子 。由于细菌核区DNA的功能与 真核细胞 染色体的功能相同，因此又称其为细菌染色体。 二、 质粒 细菌的DNA除大部分集中于核质（染色体）内，尚有少部分（约1～2%）存在于染色体外，称为质粒。质粒与染色体的相似处为：质粒亦为双链环形DNA，不过其分子量远比染色体为小，仅为细菌染色体DNA的0.5～3%。质粒亦可...
...与高等生物之间，例如在 土壤微生物 中，存在于根 癌 土壤 杆菌 （Agrobacterium tumefaciens）中的200kb Ti质粒上的T-DNA基因片段可整合进植物细胞的 基因组 中。即：根癌土壤杆菌中的T-DNA可转移到植物细 胞核 内。T-DNA还可以携带一定的 外源基因 ，在植物基因工程中被广泛地用做基因转移载体［8］。此外，Ri质粒也可...
...与高等生物之间，例如在 土壤微生物 中，存在于根 癌 土壤 杆菌 （Agrobacterium tumefaciens）中的200kb Ti质粒上的T-DNA基因片段可整合进植物细胞的 基因组 中。即：根癌土壤杆菌中的T-DNA可转移到植物细 胞核 内。T-DNA还可以携带一定的 外源基因 ，在植物基因工程中被广泛地用做基因转移载体［8］。此外，Ri质粒也可...
...码的LAPTM4B-35蛋白在绝大多数人肝癌、肺癌等恶性肿瘤中明显超表达，表达水平与癌瘤组织的病理分级呈正相关，而与分化程度呈负相关。无论以质粒或病毒为载体将编码LAPTM4B-35和LAPTM4B-24的cDNA分别导入细胞均证明，LAPTM4B-35超表达可促进细胞抗凋亡和增殖失控、迁移以及侵袭能力增强，并可在裸鼠身上100%生成血管极为丰富的癌瘤；而经...
...特异性。 为探讨hTERT基因对HeLa特异性治疗的新方法，研究人员采用克隆技术，构建hTERT基因启动子调控的胸苷激酶基因（tk）真核表达载体pCI-neo/hTERT-tk，分别用脂质体法转染HeLa和正常血管内皮细胞（ECV304），并通过克隆扩增后，用RT-PCR法检测tk基因的表达情况，用流式细胞术检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对宫颈...
... 实验原理 外源基因进入细胞主要有四种方法： 电击 法、磷酸钙法和脂质体介导法和 病毒 介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的 穿孔 让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的 病毒感染 细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度...
...、治疗肿瘤所需蛋白量大，需长期、反复追加用量，使用不方便等，这些缺点阻碍它的应用，于是需要开发基因形式的内皮抑素。 ▲基因形式 根据所使用的载体不同，基因形式的内皮抑素可分为质粒、腺病毒、逆转录病毒、脂质体和转内皮抑素基因双歧杆菌介导的内皮抑素。给药途径又分为直接瘤内注射、局部肌肉注射和静脉注射。因治疗方式、给药途径、表达产量的不同，治疗效果也各异。 脂质体...
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