（一）抗体的制备 这是免疫细胞化学技术的首要试剂，必需制备具有很高特异性和敏感性的高效价抗体，这将在本书第二章 中详述。目前国内外市场各种特异性抗体日益增多，许多实验室直接应用市售产品，现在我国自制抗体种类少，发展抗体生产十分必要。尤其要定位一种新的抗原物质，能够自制较好。 （二）抗体的配制 包括抗体贮存液和抗体使用液的配制方法。新制备或购进的是原液或冻干品...
...体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来的细胞...
...组织成分了生非特异结合。 在HRP标记抗体中，常用的偶联剂有戊二醛、过碘酸钠及Maleimide等，现简介如下。 1．戊二 醛标记法戊二醛为制备各种酶标抗体最常用的偶联剂。市售戊二醛往往含有戊二酸、丙烯释及戊二醛自身聚合本等杂质，故需纯化后使用。戊二醛的纯度用含杂质的二醛的单体戊二醛的OD比值表示，它们的最大吸收光波长分别为235nm 和280nm，二者的O...
...，分离得到血清。向血清中按每1ml加0.33496g KBr，使其血清密度为d=1.215，或者按等体积加d=1.215的KBr液，按前述两方法铺在血清上面，按40kr/min(100k×g)速度，离心40h。离心完毕，将淡黄色上层脂蛋白与无色的中间层除去，下层液上再铺d=1.215溶液，重复上述离心操作。将下层液，对0.15mol/l NaCl,0.3mm...
...效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。⑤标记方法简单、安全无毒。⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。 常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。以FITC标记为例，搅拌标记法为：先将待标记的蛋白质溶液用0.5ml/LpH9.0的碳酸盐缓冲液平衡，随后在磁力搅拌下逐...
制备单克隆抗体是复杂而费时的工作，整个技术流程如图11-2。 （一）抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×10 7 个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。 选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小...
利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），这类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针，避免了用双链DNA探针在杂交中自我复性，提高杂交效率。⑤寡核苷酸探针可以检测小DNA片段，在严格的杂交条件下，可用于检测在序列中单碱基对的错配。 因此...
抗原和抗体是免疫学检验的两大重要因素，也是整个免疫反应的基本条件。抗原的纯化是制备特异性抗的先决条件，制得的抗体可用于纯化抗原和检测抗原。抗体有单克隆和多克隆两类。 单克隆抗体用杂交瘤技术制备（详见第十一章），多克隆抗体存在于免疫动物抗血清中。近年来又出现了基因工程抗体（单链抗体）。本章仅叙述抗原纯化和多克隆抗血清制备技术。
...因佐剂加入后粘度较大）。其他途径还有肌内、腹腔、静脉、脑内等，但较少应用。如抗原极为宝贵可采用淋巴结内微量注射法，抗原只需10～100μg；方法是先用不完全佐剂在足作基础免疫（预免疫），10～15天后可见肘窝处有肿大的淋巴结（有时在腹股沟处触及），用两手指固定好淋巴结，消毒后用微量注射器直接注射入抗原（一般不需要佐剂）。 免疫间隔时间也是重要因素，特别是首次...
...的要求 1．正确理解统计研究的三个基本步骤一搜集资料、整理资料、分析资料—和它们之间的关系。 2．学会拟制调查表，整理表的统计表的基本原则和方法。 3．重点学会如何对原始资料进行整理，并正确绘制图表。 二、内容、步骤 1．按下题要求自制调查卡片一份 某医师想观察胎盘娩出方式与人工 流产 史的关系，须要统计项目是人工流产史（流产胎次）和胎盘娩出方式（包括自娩、...
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