(一) 玻璃 器皿的清洁 制备胶体金的成功与失败除试剂因素以外玻璃器皿清洁是非常关键的一步。如果玻璃器皿内不干净或者有灰尘落入就会干扰胶体金颗粒的生成,形成的颗粒大小不一,颜色微红、无色或混浊不透明。我们的经验是制备胶体金的所有玻璃器皿先用自来水把玻璃器皿上的灰尘 流水 冲洗干净,加入清洁液(重铬酸钾1000g,加入浓硫酸2500ml,加蒸馏水至10000m...
如果有较多的大小不等的金颗粒及有椭圆形,三角形金颗粒存在应重新制备。一般造成这种情况的主要原因是在加还原剂的时候不是迅速一次加入,而是多次加入。再者搅拌不均匀,速度太慢没有搅拌起来,造成了颗粒大小不等。制备量的多少,容器的大小,加热的时间等也影响胶体金颗粒的大小。制备了合格的胶体金以后,放在室温或4℃保存。避免低温冻存,因为冻存可导致胶体金凝集,破坏了胶体状...
胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK 2 CO 3 ,需要降低胶体金的pH值时可用0.1n HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头,因此,一般用精密的pH试纸测定其pH...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下: (1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 (2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。 (3)在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或...
(一)胶体金的颜色 溶胶的颜色决定于分散相物质的颜色、分散相物质的散度和入射光线和种类,是散射光还是透射光,粒子越小,分散度越高,则散射光的波长越短,对同一种物质的水溶胶来说,粒子大小不同,颜色亦不同,胶体金颗粒在5~20nm之间,吸收波长520nm,呈 葡萄酒 红色,20~40·nm之间吸收波长530nm,液体为深红色,60nm的金溶液主要吸收波长600n...
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
(1)取0.01%HAuCl 4 上水溶液100ml,加热至沸腾。 (2)加入40μl 195 Au。 (3)迅速加入4ml1% 柠檬 酸三钠水溶液,5~7min出现透明的橙红色。 (4)其含量为I×10 6 脉冲数/min。 (八)微波制备液体金方法。
用免疫斑点法或免疫细胞化学染色等方法可鉴定抗体的标记效果 1.免疫斑点法 在处理好的硝酸纤维素膜上分别滴加100~10-7系列稀释的抗原,斑点直径0.25cm, 空气中干燥,80℃多聚甲醛蒸气固定1h,然后分别以胶体铁标记的抗体一步法或用桥抗联接胶体铁标记物的间接法染色,普鲁士蓝呈色观察。一步法所难检测到的抗原量为10-2~10-3μg,间接法 敏感性至少增...
胶体金试验法,是检验中一种特殊检查方法,用于临床诊断和鉴别诊断。
胶体金试验法,是检验中一种特殊检查方法,用于临床诊断和鉴别诊断。
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