RNA酶A(ribonuclease A)作用于嘧啶核苷酸的3’磷酸根上,切开与相邻核苷酸连接的5’磷酸键。另一种RNA酶T1只作用于鸟嘌呤核苷酸的3’磷酸根,切开与相邻核苷酸连接的5’磷酸键。人体的分泌物如唾液,汗液中都含有RNA酶。因此在操作RNA样品时,必须戴手套,实验用的 玻璃 器皿都要经250℃烘烤4h(RNA酶耐热),或用RNA酶的抑制剂处理。
...温度)。该消化液时间约为5~30min。 2.0.4%胃蛋白酶 试剂:胃蛋白酶 400mg 0.1N HCl 100ml 配制方法:同胰蛋白酶。消化时间在37℃约为30min。 3.0.06% Pronase 试剂:Pronase 0.06g 0.05mol/L TB(pH7.5) 100ml 配制方法:同前。 在免疫细胞化学染色中,有时经Formalin过...
...术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子,要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来,需要各种限制性核酸内切酶(restriction endonuclease);要把不同片段连接起来,需要DNA连接酶(ligase);要结合基因或其中的一个片段,需要DNA酶(DNa polymerase)等。因此,酶是DNA重组技术中必不可...
根据标记物的不同,免疫细胞化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术,免疫酶细胞化学技术,免疫铁蛋白技术,免疫金-银细胞化学技术,亲和免疫细胞化学技术,免疫电子显微镜技术等。近些年来,核酸分子原位杂交技术采用生物素、地高辛等非放射性物质标记探针,和免疫细胞化学技术密切结合,发展为杂交免疫细胞化学技术。不同的免疫细胞化学技术,各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是...
...膜瘤 、神经鞘膜瘤和 垂体腺瘤 ,再次为孤立性 神经纤维瘤 、 神经纤维瘤病 、丛状神经纤维瘤、节 细胞瘤、节 细胞 神经母细胞瘤 、神经母细胞瘤以及转移瘤等,其余各类肿瘤均属少见。这些肿瘤,一般情况下,应用H·E染色,在光镜下便可作出病理诊断。但是,有时对其细胞起源、细胞学类型、分化程度,特别是各肿瘤间的鉴别,诊断相当困难。近10多年以来,免疫细胞化学的兴...
...量高亲合力之抗体相遇时,可形成大分子的不溶性免疫复合物,当系膜细胞清除能力降低时,即沉积于肾小球系膜区内而引起肾小球肾炎。此外,除上述之体液免疫发病机制外,目前已有多数学者证实细胞免疫亦在肾小球肾炎的发病机制中起重要作用。所有这一系列肾炎发病机制的深入研究,皆有赖于免疫学理论的不断进展和免疫细胞化学技术的应用。目前,应用免疫细胞化学技术对肾脏疾病的诊断更为重...
反转录酶(Reverse transcripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子,当以mRNA为模板时,先合成单链DNA(ssDN...
大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ(exonucleaseⅢ)是从带3’-OH末端的双链DNA,按3’→5’方向切除5’单核苷酸: 大肠杆菌核酸外切酶Ⅶ则是从单链DNA的3’端和5’端切除寡核苷酸(两种形式): (1)(2) 前一种酶需要镁离子作辅助因子才有活性;后一种酶则不需镁离子,因此即使在有螯合剂EDTA的情况下也有活性。另一种从噬菌体λ感染的大肠杆菌中提取的λ核酸...
免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons等(1950)建立,经过近43年的发展,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与亲合化学技术如 葡萄 球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激光技术、电子计算机和扫描电视等技术结合发展为定量免疫荧光细胞化学技术;荧光激...
...eno,etal, 1983,Murakami, et al 1986)。1989年日本学者Seno等在抗体分子上标记了胶体铁,将胶体铁引入免疫细胞化学技术(Seno,et al. 1989)。杨守京等在胶体的制备方法及其标记物的纯化等方面做了改进,成功地用于 流行性出血热 病毒抗原的检测(杨守京,等,1992)。该方法具有较高的特异性与敏感性,背景染色干净...
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