...分之百的，因而最后生长繁殖出来的细胞并不同都带有目的序列。一般一个载体只携带某一段外源DNA，一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重组体（recombinant）。将目的重组体筛选出来就等于获得了目的序列的克隆，所以筛选(dcreening)是基因克隆的重要步骤。在构建载体，选择宿主细胞、设计...
...分之百的，因而最后生长繁殖出来的细胞并不同都带有目的序列。一般一个载体只携带某一段外源DNA，一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重组体（recombinant）。将目的重组体筛选出来就等于获得了目的序列的克隆，所以筛选(dcreening)是基因克隆的重要步骤。在构建载体，选择宿主细胞、设计...
...白色的 菌落 ，其细菌中就很可能含有插入目的序列的重组质粒，这样就很容易获得目的序列的克隆。 根据重组载体的标志来筛选，可以筛选去大量的非目的重组体，但还只是粗筛，例如细菌可能发生 变异 而引起抗药性的改变，却并不代表目的序列的插入，所以需要做进一步细致的筛选。 二、 核酸 杂交法 利用标记的核酸做 探针 与转化细胞的DNA进行 分子杂交 ，可以直接筛选和鉴...
...NA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得细胞特异表达的基因。但对 真核细胞 来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有含子和 外显子 的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过 剪接 、去除了 内含子 的cDNA。 图20-9 cDNA文库的构建 三、 聚合酶链式反应 （PCR） 如果已经知道目的基因的序...
一、基因组DNA文库
...技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时，可以设计合成扩增引物，进行模板DNA的PCR扩增，所得的PCR产物较小，仅有300多bp，且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析，就可以采用DNA克隆的方法，将此PCR产物连接到细菌质粒上，再进一步纯化后测序，以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。 下面...
...技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时，可以设计合成扩增引物，进行模板DNA的PCR扩增，所得的PCR产物较小，仅有300多bp，且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析，就可以采用DNA克隆的方法，将此PCR产物连接到细菌质粒上，再进一步纯化后测序，以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。 下面...
将目的 基因 或序列插入载体，主要靠 DNA 连接酶 和双链DNA粘末端 单链 序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。 一、 粘性末端 连接 如果目的序列两端有与载体上相同的 限制性核酸内切酶 位点 ，则同一 限制酶切 开产生的粘末端，在降低温度退火时，能重新互补结合，在DNA连接酶 催化 下，目的序列就与载体DNA链相连接（见图20-5）。 图20-5...
...技术在 动脉粥样硬化 等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时，可以设计合成扩增引物，进行模板DNA的PCR扩增，所得的PCR产物较小，仅有300多bp，且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析，就可以采用DNA克隆的方法，将此PCR产物连接到细菌质粒上，再进一步纯化后测序，以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。 下面...
将目的基因或序列插入载体，主要靠DNA连接酶和双链DNA粘末端单链序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。
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