...顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同,从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交,即可分析限制性长度片段多态性(restriction fragment ...
...大部分限制性核酸内切酶识别DNA序列具有回文结构特征,切断的双链DNA都产生5’磷酸基和3’羟基末端。不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同,结果有三种不同的情况:①产生3’突出粘性末端(cohesive end):以Eoor 为例:...
...限制性内切酶作用部位(切点)也不同,这种酶切点只有4~6个核苷酸长度。因此来源于不同HLA单倍型的DNA可被一种内切酶切成不同长度的片段。在实际工作中,从细胞中提取基因组DNA(genomic DNA)的多态性比实际HLA-Ⅱ类抗原的多态性...
...外源DNA片段末端的性质,以及质粒载体和外源DNA上限制酶切位点的性质决定了质粒或噬菌体与外源DNA连接反应的不同策略。(一)外源DNA带有非互补突出端的片段用两种不同的限制酶分别消化质粒等载体和外源DNA,可以产生带非互补突出端的片段,...
...mg/ml;作用时间一般为2~4天,最长可达7天。蛋白酶K可分次加入,并注意不时震摇,使酶与组织充分接触。Koshiba等发现,利用Goelz等和Dubeau等提出的DNA提取方法,不能够得到令人满意的完整DNA。尿素和胍(guanidine...
...在各种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等病人血清中常可检出抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体,其中抗单链DNA(ssDNA)抗体可见于各种自身免疫病和结缔组织病人血液中,故无多大诊断特异性。但抗双链DNA(dsDNA)抗体主要见于...
...以12000g离心5min。(8)小心吸尽上清液,将离心管倒置于一张纸巾上,再将附于管壁的液滴除尽。(9)用75%乙醇于4℃洗涤DNA,同上离心去上清真空抽干。(10)加50μl的1×TE(含20μg/ml无DNA酶的胰RNA酶),振荡,...
...欲走返楼上会婵娟。硬着粉壁一重来隔住,所以唔能偷步入重帘。此时听得难禁抵,真系心慌意乱口难言。摇摇忽又偷思道:书中曾说实根,佢话映娘近者沾寒病,故此传书约我到花轩,哩下做乜映姐尚能来饮酒?睇来此事己虚然。我想两娇原是多奸计,只怕系来教我食...
...DNA单链末端成为双链。如果供给32P标记的三磷酸核苷酸,则可使DNA带上同位素标记。当用交错切割的限制酶切成带有单链粘性末端的DNA片段,要用被切成平头末端的DNA片段连接时,可以先用Klenow片段使粘性末端的单链补齐成为平头,然后在...
...在各种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等病人血清中常可检出抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体,其中抗单链DNA(ssDNA)抗体可见于各种自身免疫病和结缔组织病人血液中,故无多大诊断特异性。但抗双链DNA(dsDNA)抗体主要见于...
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