...mg/ml;作用时间一般为2~4天,最长可达7天。蛋白酶K可分次加入,并注意不时震摇,使酶与组织充分接触。Koshiba等发现,利用Goelz等和Dubeau等提出的DNA提取方法,不能够得到令人满意的完整DNA。尿素和胍(guanidine...
...。经限制性内切酶消化后,乙醇固定组织DNA均显示由于重复DNA序列存在所产生的特征性卫星带,说明DNA被完成消化。Southern印迹杂交结果与冰冻组织一致。Sato 等(1990)用AMex方法处理组织,既可保存许多抗原成分,亦可使大...
...在各种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等病人血清中常可检出抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体,其中抗单链DNA(ssDNA)抗体可见于各种自身免疫病和结缔组织病人血液中,故无多大诊断特异性。但抗双链DNA(dsDNA)抗体主要见于...
...以12000g离心5min。(8)小心吸尽上清液,将离心管倒置于一张纸巾上,再将附于管壁的液滴除尽。(9)用75%乙醇于4℃洗涤DNA,同上离心去上清真空抽干。(10)加50μl的1×TE(含20μg/ml无DNA酶的胰RNA酶),振荡,...
...DNA单链末端成为双链。如果供给32P标记的三磷酸核苷酸,则可使DNA带上同位素标记。当用交错切割的限制酶切成带有单链粘性末端的DNA片段,要用被切成平头末端的DNA片段连接时,可以先用Klenow片段使粘性末端的单链补齐成为平头,然后在...
...在各种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)等病人血清中常可检出抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体,其中抗单链DNA(ssDNA)抗体可见于各种自身免疫病和结缔组织病人血液中,故无多大诊断特异性。但抗双链DNA(dsDNA)抗体主要见于...
...酶的胰RNA酶),振荡,贮存于-20℃。(二)质粒DNA的大量制备(1)同上1.(1)(2)将1ml含菌液倒入含相应抗生素的Lb 100ml中,37℃振荡培养至A590=1.0(5~6h)。(3)加氯霉素(170μg/ml)扩增,37℃温箱...
...细胞的核酸酶所水解.这样细胞就构成了限制一修饰体系,其功能就是保护自身的DNA,分解外来的DNA,以保护和维持自身遗传信息的稳定,这对细菌的生存和繁衍具有重要意义。这就是限制性核酸内切酶名称中“限制”二字概念的由来。...
...通过转录阻遏蛋白例如甲基结合蛋白(MBDs)的补充来介导的,而甲基结合蛋白是包括组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的一个大复合物的一部分。此外,DNA甲基化还可以通过阻滞转录因子直接抑制转录。 ■组蛋白尾段改变 DNA环绕着8个组蛋白的核心构成核...
...RFLP)。即当DNA序列中某一个碱基发生突变,使突变所在部位的DNA序列获得或丢失某种限制性核酸内切酶位点;或当DNA分子内部发生较大的顺序突变如缺失、重复、插入,或DNA高变区内某串联重复顺序的拷贝数不同致使其两侧限制性核酸内切酶位点发生相对...
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