核酸 存在于多种 细胞 ,如 病毒 、 细菌 、 寄生虫 、动植物细胞;多种 标本 中,如 血液 、组织、 唾液 、尿液等其它来源的标本。因此分离方法复杂而多样。又因各种 DNA 、 RNA 的丰度差异,各种分析方法对核酸的纯度与量的要求有差异,因此在实验前应对采用的方法有所了解和选择。总的说来核酸的分离与 纯化 是在溶解细胞的基础上,利用 苯酚 等有机溶剂...
核酸存在于多种细胞,如病毒、细菌、寄生虫、动植物细胞;多种标本中,如血液、组织、唾液、尿液等其它来源的标本。因此分离方法复杂而多样。又因各种DNA、RNA的丰度差异,各种分析方法对核酸的纯度与量的要求有差异,因此在实验前应对采用的方法有所了解和选择。总的说来核酸的分离与纯化是在溶解细胞的基础上,利用苯酚等有机溶剂抽提(核酸溶于缓冲液,即水相),分离,纯化;乙...
...述各种方法制备酶标抗体时,除产生酶标抗体外,还有未标记的抗体蛋白、游离酶、酶二聚体及偶联剂等。这些均可使酶标抗体的敏感性下降,故酶标抗体须经纯化后应用。现简介几种常用的纯化方法。 1.多聚体的分离实验中,不同的试剂形成的多聚体的数量各异,即使同样的实验药物和程序,在不同的时间制备的酶标抗体中,多聚体的数量亦不相同。多聚体较单体含酶量多,与组织的非特异吸附增强...
....2~1mg的蛋白量,将IgG在电磁搅拌下逐滴加入到胶体铁,搅拌5min后,通过CB平衡的Amber liaht CC-50层析柱,CB洗脱纯化.作者在胶体铁的制备方法进行了改进,吸收了Murakami等胶体的优点,所制备的胶体铁,颗粒小,稳定性高,其pH值近中性,标记效果好,CM-sephadex C-50(Pharmacia)可取代Amberlight ...
不论使用何种制备方法,要获得合格的标记化合物,都必须将反应物经过仔细的分离、纯化。另外,一些标记化合物,经过一定时间的存放后,往往会出现不纯物,而需再纯化。如碘标记生长激素( 125 --HGH),在刚标记的第2天,从Sephadex G-100过滤谱上可见,几乎所有的碘化HGH都集中在峰II;保存1个月后,峰II组份减少,峰I和峰III成分明显增加,峰I是...
...晶,在室温或4℃冰箱内使之出现铁蛋白结晶。此铁蛋白结晶以2%硫酸铵(pH5.58)溶解后,如上述再用硫酸镉使之结晶。反复溶解,结晶六次,达到纯化。纯化后铁蛋白在半饱和的硫酸溶液内可保存1~2年。用时以蒸馏水透析除盐后即可应用,应用前可以用负染色法在电镜下观察,了解铁蛋白的完整性和纯度。 商品制备的铁蛋白是用2%硫酸铵溶液稀释的1%~2%溶液(pH5.85)。...
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
目前用于放射免疫测定中的分离方法很多,各有其优缺点,下面介绍几种常见的分离方法: (1)吸附分离(固相颗粒) 活性碳吸附剂(目前常用) 硅镁吸附剂( 滑石粉 等) 交换树脂吸附剂 (2)蛋白沉淀剂 硫酸铵、硫酸钠 聚乙二醇(PEG)(目前常用) 无水乙醇、丙醇等 (3)免疫分离剂(第二抗体) (4)磁性分离剂 磁化活性碳吸附剂 磁化固相抗体 (5)固相包被分...
放射免疫分析时加入的抗原和抗体的量极微,反应所形成的复合物并不能成为肉眼所能辨认的不溶性沉淀物,但是放射免疫分析必须分别测量与抗体结合的(B)和游离的(F)抗原,所以,B、F的分离是放射免疫分析中的一个重要环节 。根据抗原—抗体复合物与游离抗原理化性质或免疫学性质的不同,可采取各种分离技术。
分离方法的选择直接影响分析的质量,通常需满足以下要求: ①使B和F分离完全;②不受外界因素的干扰而影响分离效果;③与游离抗原的非特异性作用尽可能小;④操作简便,分离迅速,重复性好,适用于大量样品分析;⑤来源广,价格低廉,便于使用,适合RIA技术自动化。
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