1978年Collins和Hohn构建一种新型的大肠杆菌克隆载体，命名为cosmid（柯斯质粒）。它是用正常的质粒同噬菌体λ的cos位点构成。例如，柯斯质粒pHC79系由质粒pBR322和噬菌体λ的cos位点的一段DNA构成（图23-5），全长43.kb。在包装时，cos位点打开而产生噬菌体λ的粘性末端。由于pHC79有pBR322DNA，所以也就有氨苄青霉...
质粒 (plasmid)， 染色体 外能进行自主复制的 遗传 单位。包括 共生生物 、 真核生物 的 细胞器 和 细菌 细胞 中染色体以外的单纯的 脱氧核糖核酸 ( DNA ) 分子 。这个名词是 J.莱德伯格在1952年提出的，不过现在习惯上已用来专指细菌、 酵母菌 和 放线菌 等 生物 中染色体以外的单纯的 DNA分子。某些既能独立地存在于 细胞质 中又...
所谓 穿梭质粒 是指一类人工构建的 具有两种不同 复制起点 和 选择标记 ，因而可以在两种不同类群 宿主 中存活和复制的 质粒 载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到 真核生物 表达载体 的构建， 如用于 枯草 的pBE2、 酵母 的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒 。这些穿梭质粒不仅可以在 大肠杆菌 中复制...
质粒 具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用 限制性内切酶 切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到 重组质粒 转化 细菌 ,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体...
质粒（plasmid）是许多种细菌中发现的染色体外的遗传因子，它是闭合环状的双链DNA分子，大小从1kb直到200kb以上。质粒所带的基因通常有利于宿主细胞。例如基因的产物是某些抗生素或对某些抗生素的抗性、能降解某些复杂的有机化合物、产生大肠杆菌素和肠毒素、产生限制酶或修饰酶等。 在天然条件下，许多种质粒是通过类似于细菌接合的过程传递给新的宿主。在实验室条件...
质粒 （plasmid）是 细菌 或 细胞 染色质 以外的，能自主复制的，与细菌或细胞 共生 的遗传成分。其特点如下： ①是染色质外的双链共价闭合环形 DNA （covalentlyclosed circuar DNA,cccDNA），可自然形成 超螺旋结构 ，不同质粒大小在2-300kb之间，＜15kb的小质粒比较容易分离 纯化 ，＞15kb的大质粒则不易...
细菌的DNA除大部分集中于核质（染色体）内，尚有少部分（约1～2%）存在于染色体外，称为质粒。质粒与染色体的相似处为：质粒亦为双链环形DNA，不过其分子量远比染色体为小，仅为细菌染色体DNA的0.5～3%。质粒亦可携带遗传信息，可决定细菌的一些生物学特性。然而质粒却有一些与染色体DNA不同的特性。 1．质粒并非细菌生存所必不可少的遗传物质。细菌如失去染色体，...
应用的最广泛的质粒载体是pBR322，它属松弛型质粒，有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因，有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸，排列顺序已全部测定，基本结构如图23-3。 当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。 图23-4 pBR322克隆DNA片段的程序 从图23-4可见，外...
真核生物中的酵母是国内外广泛研究的载体-受体系统之一。这是一个共价闭环DNA分子（cccDNA），平均周长2μm，所以称为2μm DNA质粒，在每个酵母细胞里约有100个拷贝。已有人把2μm DNA同pBR322 DNA构建成双功能质粒，可在大肠杆菌和酵母菌中复制。这种质粒带有 啤酒酵母 的二个基因（his 3和Leu 2），所以很容易用酵母的营养缺陷型菌株...
质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下： ①是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalentlyclosed circuar DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，＜15kb的小质粒比较容易分离纯化，＞15kb的大质粒则不易提取。 ②能自主复制，是能独...
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