(1)透析除盐:蛋白质溶液内应除去多余的电解质,不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位,影响蛋白质的吸附,因此,标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水(0.005mol/l NaCl , pH7.0)透析。 (2)去除蛋白质中的沉淀:长期低温保存的蛋白质或4 ℃ 较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/...
(1)光电比色法:制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1ml),分别加入5ml胶体金中,迅速混匀,然后,各加入1ml 10% NaCl溶液,摇匀,静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小,OD在520~580nm之间测定,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下: (1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 (2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。 (3)在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或...
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。
要制备高比度、高纯度与免疫化学活性好的标记物,首先要有高纯度、良好免疫活性的抗原。用作放射标记加网免疫分析的特异性,所以若用纯度不高的抗原作标记,则标记后必须采取适当的步骤除去杂质,以获得高纯度的标记物。标记对象的纯化应尽量采用温和的方法,否则在纯化操作中已受潜在性损伤的蛋白质(这时表面上活性可能还是良好的),再经标记反应时所受的损伤,活性就会显着降低,影响...
蛋白质(protein)是一种复杂的 有机化合物 ,是人体的必须营养素。蛋白质是细胞组分中含量最为丰富、功能最多的高分子物质,在生命活动过程中起着各种生命功能执行者的作用,几乎没有一种生命活动能离开蛋白质,多以没有蛋白质就没有生命。 蛋白质占人体重量的16.3%, 人体干重 的54%。人体中估计有10万种以上的蛋白质。蛋白质主要由 氨基酸 组成,因氨基酸的组...
蛋白质(protein)是一种复杂的 有机化合物 ,是人体的必须营养素。蛋白质是细胞组分中含量最为丰富、功能最多的高分子物质,在生命活动过程中起着各种生命功能执行者的作用,几乎没有一种生命活动能离开蛋白质,多以没有蛋白质就没有生命。 蛋白质占人体重量的16.3%, 人体干重 的54%。人体中估计有10万种以上的蛋白质。蛋白质主要由 氨基酸 组成,因氨基酸的组...
2.2.1 蛋白质 的 化学 蛋白质 分子 是 生物 大分子, 分子量 约从5,000到数百万。其基本单位是 氨基酸 ,通式为: 由于氨基和羧基都在α-C上,故称为α-氨基酸。式中R表示 侧链 。侧链不同,氨基酸的种类就不同。组成蛋白质的氨基酸一共有20种,各氨基酸按一定的排列顺序由肽键( 酰胺键 )联结成长链。肽键是由一个 氨基酸残基 的α-羧基和另一个氨...
蛋白质的作用 蛋白质是生命的物质基础:是人体内的三大组成部分(蛋白质、脂肪、碳水化合物)之一。作为人体不可缺少的营养成分约占人体体耋宦20%,每天约有3%的蛋白质参与新陈代谢完成人体的各种生理活动。 大豆蛋白质粉是采用世界先进的提取技术和设备。并利用蛋白质后修饰技术从大豆中提取的营养物质精制而成。 蛋白质的生理功能 蛋白质是维持机体的生长、组成、更新和修补人...
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