各种 遗传病 的 基因 异常是不同的,同一遗传病也可以有不同的基因异常,但这些异常大体可分为基因缺失和 突变 两大类型。后者包括单个 碱基置换 、微小缺失或插入。近年来不发现一些遗传病是由于基因内的 三核苷酸 重复顺序增加引起的,根据对基因异常类型的了解,可以采用不同的诊断方法(表13-2)。如基因缺失可用 基因探针 杂交,PCR 扩增 直接检测; 点突变 ...
各种遗传病的基因异常是不同的,同一遗传病也可以有不同的基因异常,但这些异常大体可分为基因缺失和突变两大类型。后者包括单个碱基置换、微小缺失或插入。近年来不发现一些遗传病是由于基因内的三核苷酸重复顺序增加引起的,根据对基因异常类型的了解,可以采用不同的诊断方法(表13-2)。如基因缺失可用基因探针杂交,PCR扩增直接检测;点突变可用等位基因特异的ASO探针、S...
(一) 试剂 (1) 引物 :决定 扩增 的特异性。根据检测的 DNA 不同,选用不同引物,每种病原微生 物都有自己特异的引物。 (2)耐热的DNA 聚合酶 :此酶是从耐热 细菌 中分离出来的,能耐受高温90℃-100℃。 (3)10×PCR 缓冲液 :500mmol/l KCl;100mmol/LTris-HCl(pH8.4,20℃)150mmol/L M...
随着 基因工程 技术的发展,新的 核酸 分子杂交 技术不断出现和完善,核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型。固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上,一条反应核酸链游离在溶液中,固体支持物有 硝酸 纤维素滤膜、 尼龙 膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。液相杂交所参加反应的两条核酸链都游离在溶液中。 在固相杂交中,未杂交的游离片段...
...分析证明其扩增的DNA序列与原模板DNA一致。扩增过程中, 单核苷酸 的错误参入程度很低、其错配率一般只有约万分之一,足可以提供特异性分析,选用各型 病毒 相对的特异 寡核苷酸 引物。PCR能一次确定病毒的多重 感染 。如用HPV11和HPV16型病毒引物检测病妇 宫颈刮片 细胞 可以发现部分病人存在HPV11和HPV16两型的双重感染。 (二)高度敏感:理...
基因诊断 操作的对象为 基因 或其片段。基因是遗传学上的一个概念,是在 染色体 上占有一定的位置,表现一定功能的基本单位。基因的物质基础是 脱氧核糖核酸 ( DNA )(有些 病毒 的基因是 核糖核酸 , RNA )。 原核细胞 (如 细菌 和病毒)的基因单位较小,其排布一般是连续的。 真核细胞 的基因一般较大,其排布是不连续的,它被称为 插入序列 的部分所...
DNA 作为遗传物质的基本特点就是能够准确地自我复制,而DNA的互补双 螺旋结构 对于维持这类遗传物质的稳定性和复制的准确性都是极为重要的。 (一)DNA复制的方式 从前面的内容可知,DNA是由两条互补的 多核苷酸 链组成的,其中一条链上的 核苷酸 排列顺序可以决定另一条链上的核苷酸顺序。据此推测,在复制过程中,首先DNA双螺旋的两条多核苷酸链之间氢键断裂,...
...或 单链DNA 探针。现已获的DNA探针种类很多,有 细菌 、 病毒 、 原虫 、 真菌 、动物和人类 细胞 DNA探针,这类探针多为某一 基因 的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的 毒力 因子 基因探针 和人类ALU探针,这些DNA探针的获得有赖于 分子克隆 技术的发展和应用。以细菌为例,目前 分子杂交 技术用于细菌的分类...
...杂交 。因此分子杂交的基础是DNA的变性与互补,也可以杂交形成新的双螺旋结构。目前杂交技术已广泛地应用于核酸结构与功能的研究。将已知的特定 基因 (如先天性遗传 疾病 的某些特定基因)用 同位素标记 ,制备成 基因探针 ,利用分子杂交技术,基因探针可与 同源 序列互补形成杂交体,因此可用检测组织细胞内有无特定基因或DNA片段,如临床上已应用于 产前诊断 遗传...
...用于PCR的标本必须经适当处理后才能使用,因为标本中的许多杂质能抑制Taq DNA聚合酶的活性。另外,处理标本可使待 扩增 DNA暴露,能与 引物 复性 。关于PCR标本制备各种专业书中介绍了许多,我们实验发现操作复杂、不慎便容易造成污染,且不实用。现介绍一种简单快速的处理方法即3%异硫氰酸胍和待检标本混合100℃,10min,离心取上清作为PCR模板即可。
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