凝集素的特性及标记原理详见第五章 ,近年来,凝集素电镜标记技术应用日益广泛,且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多,常用的有凝集素—酶(常用为HRP)、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术(包埋前染色)简介如下(Sterit 和Kreatzberg,1987)。 (1)固定:常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织,...
凝集素 (Lectin)是指一种从各种植物,无 脊椎动物 和高等动物中提纯的 糖蛋白 或结合糖的 蛋白 ,因其能 凝集 红血球(含 血型物质 ),故名凝集素。常用的为 植物凝集素 (Phytoagglutin,PNA),通常以其被提取的植物命名,如 刀豆素 A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin,WGA)...
一、凝集素电镜标记技术
1.HRP标记凝集素法 适用于小量的凝集素标记(Ponder 1983)。 (1)HRP的活化 ①将10mg HRP(SigmaType VI)溶解在1ml 0.3mol/L 的重碳酸钠溶液中(1.25g/50ml)。 ②加50μl含1%氟二硝基苯的无水乙醇溶液,室温轻度搅拌1h。 ③加1ml含0.06mol/L的过碘酸钠的蒸馏水(0.62g/50ml),室...
植物凝集素最早发现于1888年,Stillmark在蓖麻(Ricinus communis L.)籽萃取物中发现了一种细胞凝集因子,它具有凝集红细胞的作用。它是一类具有特异糖结合活性的蛋白,具有一个或多个可以与单糖或寡糖特异可逆结合的非催化结构域。根据植物凝集素亚基的结构特征,植物凝集素分成4种类型:部分凝集素、全凝集素、嵌合凝集素、超凝集素;根据氨基酸序列...
外源凝集素 (Lectins)又称植物性 血细胞凝集 素(Hemagglu-tinins),是植物合成的一类对 红细胞 有凝聚作用的 糖蛋白 .外源凝集素可 专一性 结合碳水化合物.当外源凝集素结合人肠道上皮 细胞 的碳水化合物时,可造成 消化道 对营养成分吸收能力的下降.外源凝集素广泛存在于800多种植物(主要是 豆科植物 )的种子和荚果中.其中有许多种是...
冷凝集素 (cold agglutinin)是冷反应型抗红 细胞 抗体 ,在O一4℃时最易和红 细胞膜 抗原 结合,是IgM型,是较强的 凝集 红细胞 的一种可存在于正常人 血清 中的抗体,低效价一般没有临床意义。 参考范围 : 效价 <1:32. 临床评价 : 1、一般认为, 病毒 和其他微生物 感染 产生的 免疫反应 的副产物中就有冷凝集素,但常人并不发...
此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。 (1)临界点干燥法 ①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4 ℃ 1~2h,PBS冲洗3min×3。 如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA凝胶化,将凝胶切成2mm左右的小块,用30%的甘油—PBS浸透后置于用液氮冷却的Freon中冷却。 ②冷冻断裂,...
通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法: 1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。 2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。 3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞...
植物血球凝集素 (PHA) phytohemagg lutinin 对原来从植物中发现的,具有 凝集 红血球作用的物质,而命名的,后来发现了很多具有同样作用的物质,扩大其含义为 细胞 凝集素 中植物来源的总称—— 植物凝集素 (phytoagglutinin,plant agglutinin)或凝集素(lectin)的同义词涵义模糊。缩写pHA的多数是指从菜...
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