冷冻蚀刻法（Freeze Ftching），也称冷冻复型法（Freeze Replica）或冷冻切断（Freeze Fracture），是研究生物膜结构的重要方法之一。其主要步骤首先是将样品在液氮中冷冻，然后放到真空喷镀仪中切断，切断后的切面上有细胞器，其间还有冻成洋的水分。再加热使冰升华，将水份蒸发，把细胞器的膜结构暴露出来，这一步骤就称为冷冻蚀刻。如不进...
（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。 （2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl 2 蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。 （3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100 ℃ 蚀刻1min 。 （4）制做断裂面复型。 （5）再次氯酸钠清洗复型，蒸馏水洗后进行观察...
一、凝集素电镜标记技术
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ，近年来，凝集素电镜标记技术应用日益广泛，且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多，常用的有凝集素—酶（常用为HRP）、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术（包埋前染色）简介如下（Sterit 和Kreatzberg,1987）。 （1）固定：常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织，...
扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。
此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。 （1）临界点干燥法 ①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4 ℃ 1～2h，PBS冲洗3min×3。 如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用30%的甘油—PBS浸透后置于用液氮冷却的Freon中冷却。 ②冷冻断裂，...
关于免疫金银细胞化学的原理、试剂配制和光镜显示技术在本书第五章 已作了较详尽的叙述。免疫金银细胞化学技术说可应用于电镜水平。一般用于包埋前染色。其主要操作步骤如下： （1）组织固定振动切片机切片10～30μm。 （2）人3%正常 羊血 清，含0.1%Triton X—100 的PBS孵育30min，以封闭非特异性结合部位 （3）1%硼氢化钠的PBS孵育30m...
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外，又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
凝集素的特性及标记原理详见第五章 ，近年来，凝集素电镜标记技术应用日益广泛，且获得较为满意的效果。凝集素电镜标记技术方法较多，常用的有凝集素—酶（常用为HRP）、凝集素—生物素—酶电镜标记技术。现将凝集素—酶电镜标记技术（包埋前染色）简介如下（Sterit 和Kreatzberg,1987）。 （1）固定：常用为PLP或多聚甲醛—戊二醛固定液。如为取脑组织，...
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外，又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
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